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文檔簡介
1、五味子為木蘭科植物,分為北五味子[Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.]和南五味子(Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.)。傳統(tǒng)的中醫(yī)學觀點認為北五味子質量優(yōu)于南五味子,所以北五味子種質資源的保存和利用,對人類選育高產、優(yōu)質、抗逆新品種具有重要的意義。為了分析北五味子的遺傳背景,更好的發(fā)揮北五味子的資源優(yōu)勢,本實驗采用RAPD方法從分子水平上研究北五味子的親緣關系,為
2、北五味子的育種工作提供一定的理論基礎。本研究對長白山區(qū)北五味子的56個地區(qū)的不同群體間和群體內的種質資源進行遺傳多樣性分析。主要結果如下:
1.本研究采用四種北五味子基因組DNA提取純化方法,以基因組DNA的OD260/OD280比值為標準,選擇了一種快速、簡便、經濟的北五味子基因組DNA的提取純化方法。結果表明,本研究中所采用的改良的CTAB方法對于提高北五味子基因組DNA的質量是十分有益的。
2.以野生北五味子嫩
3、葉為實驗材料,對北五味子RAPD分析中影響PCR擴增效果的主要因素進行了研究,確定了北五味子RAPD的最適反應體系。PCR擴增的體系(總體積為25μl)為:模板DNA20ng,dNTPs200μmol/L,引物0.3μmol/L,Mg2+為2mmol/L,Taq聚合酶1Unit,10×Buffer2.5ul。PCR擴增程序為:94℃預變性5分鐘,94℃變性1分鐘,40℃退火1分鐘72℃延伸90秒。共40個循環(huán),72℃最后延伸5分鐘,4℃
4、保存。
3.利用RAPD技術對長白山區(qū)56個野生北五味子群體間進行了遺傳關系研究。從所篩選的100個UBC隨機引物中選取20個對56個樣品的基因組DNA進行PCR擴增,每條引物均能擴增出清晰的條帶,共擴增出125條帶,其中62個為多態(tài)性條帶,平均每條引物擴增條帶數為6.25,多態(tài)率為49.6%。借助于DPS9.50統(tǒng)計分析軟件分析RAPD表型數據矩陣,計算個樣品間的遺傳距離,建立親緣關系聚類樹狀圖,依據此圖,56個北五味子群體
5、間種質資源的遺傳距離為0-0.56。其中15、16、18、21、22、23、27、28之間的遺傳距離為0。二道白河和敦化大山的遺傳距離最遠,其遺傳距離為0.56。以遺傳距離0.35為標準聚類為6大類。第一類群包括12份材料,以敦化地區(qū)為主;第二類群包括3份料,以樺甸地區(qū)為主;第三類群包括8份材料,以汪清地區(qū)為主;第四類群包括14份材料,以跤河地區(qū)為主;第五類群包括8份材料,以舒蘭地區(qū)為主;第六類群包括11份材料,以安圖地區(qū)為主。
6、 4.通過對延吉依蘭北五味子群體內的RAPD分析,結果表明,利用20條隨機引物對北五味子群體內的30個種質資源進行PCR擴增,每條引物均能擴增出清晰的條帶,共擴增出124條帶,其中51條為多態(tài)性條帶,平均每條引物擴增條帶數為6.2,多態(tài)率為41.12%。借助于DPS9.50統(tǒng)計分析軟件分析RAPD表型數據矩陣,計算各樣品間的遺傳距離,建立親緣關系聚類樹狀圖,并且進一步利用DPS9.50統(tǒng)計分析軟件分析北五味子群體內的Shannon多樣
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