1、目的：探討肝移植中供肝熱缺血損傷誘發(fā)肝移植術(shù)后膽汁淤積的機(jī)制。 方法：建立近交系大鼠動(dòng)脈化原位肝移植模型，實(shí)驗(yàn)分為4組：熱缺血0分鐘(W0)、熱缺血15分鐘(W15)、熱缺血30分鐘(W30)肝移植組和對(duì)照組(C)，每組均為24只大鼠，各組分別在術(shù)后3、7、14和30天各取6只大鼠剖腹獲取肝組織標(biāo)本及取血進(jìn)行定向?qū)嶒?yàn)，并以30天剖殺組觀察術(shù)后存活情況。對(duì)所獲取標(biāo)本分別進(jìn)行常規(guī)組織學(xué)和肝臟酶學(xué)檢查，利用Real-timePCR技術(shù)

2、檢測(cè)肝組織標(biāo)本中細(xì)胞角蛋白8、18(cytokeratin，CK)、鈉/牛磺酸共同轉(zhuǎn)運(yùn)多肽(Na+/taurocholatecotransporter，NTCP)和膽鹽輸出泵(bilesaltexportpump，BESP)分子mRNA轉(zhuǎn)錄水平，采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)CK8、CK18、BSEP和Ki-67蛋白的表達(dá)變化，利用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)肝細(xì)胞縫隙連接蛋白Cx-32(connexin-32)的變化。 結(jié)果：1.W0、W15和

3、W30組術(shù)后長(zhǎng)期生存率分別為100.0％(6/6)、83.3％(5/6)、66.7％(4/6)。 2.常規(guī)組織病理結(jié)果顯示：隨著供肝熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)，移植肝損傷加重，并且恢復(fù)過(guò)程也延長(zhǎng)。 3.移植組和對(duì)照組術(shù)后第3、7、14和30天血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alaninetransaminase，ALT)和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(aspartatetransaminase，AST)均無(wú)顯著性改變。 4.血清堿性磷酸酶(alkal

4、inephosphates，ALP)結(jié)果顯示，隨著供肝熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)，術(shù)后ALP逐漸增高，14天達(dá)到高峰后逐漸下降。術(shù)后第3、7、14、30血清ALP與供肝熱缺血時(shí)間具有顯著相關(guān)性。 5.肝移植術(shù)后早期肝細(xì)胞Ki-67表達(dá)水平隨供肝熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)而增高，術(shù)后14天恢復(fù)正常。同樣膽管細(xì)胞Ki-67表達(dá)水平在移植術(shù)后早期也明顯增高，但其下降速度較肝細(xì)胞緩慢。 6.術(shù)后早期，移植組CK8mRNA轉(zhuǎn)錄水平和肝細(xì)胞CK8蛋白表

5、達(dá)水平，隨供肝熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)表達(dá)減少，并于術(shù)后14天恢復(fù)正常。CK18mRNA轉(zhuǎn)錄水平和肝細(xì)胞CK18蛋白表達(dá)水平也呈現(xiàn)類似變化。 7.術(shù)后早期，隨著供肝熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)，膽管上皮細(xì)胞CK8和CK18表達(dá)水平逐漸下降，但于術(shù)后7天恢復(fù)正常。 8.移植術(shù)后14天內(nèi)，移植組Cx-32表達(dá)在均明顯低于對(duì)照組，且隨著供肝熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)，表達(dá)逐漸下降。 9.移植組與對(duì)照組術(shù)后相同時(shí)點(diǎn)不同供肝熱缺血時(shí)間的移植組間的BSE

6、PmRNA轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯差別。NTCPmRNA轉(zhuǎn)錄水平也呈現(xiàn)類似變化。 結(jié)論：1.近交系大鼠動(dòng)脈化原位肝移植模型能夠很好的反映肝移植過(guò)程中的供肝熱缺血損傷，適合供肝熱缺血誘發(fā)的肝移植術(shù)后膽汁淤積的實(shí)驗(yàn)研究。 2.來(lái)自于無(wú)心跳供體的大鼠肝臟在熱缺血30分鐘以內(nèi)是安全的，移植術(shù)后可以長(zhǎng)期存活。 3.肝移植過(guò)程中供肝熱缺血主要損傷肝細(xì)胞，并隨著供肝熱缺血時(shí)間的延長(zhǎng)移植肝細(xì)胞損傷加重，肝細(xì)胞功能恢復(fù)早于其形