1、本論文旨在研究新型喜樹堿衍生物抑制腫瘤生長(zhǎng)的生物活性以及可能存在的作用機(jī)制。
　　通過(guò)分子對(duì)接技術(shù)和MTT方法評(píng)估三種由大連理工大學(xué)精細(xì)化工國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室合成的新型喜樹堿衍生物脯氨醇-10-羥基喜樹堿(PR-HCPT)，哌啶醇-10-羥基喜樹堿(PI-HCPT)，羥乙基哌嗪-10-羥基喜樹堿(HP-HCPT)，并對(duì)PR-HCPT促人乳腺癌細(xì)胞（MCF-7細(xì)胞）的凋亡作用及其對(duì)細(xì)胞凋亡通路蛋白表達(dá)量的影響進(jìn)行研究，探究其促人乳腺癌細(xì)

2、胞凋亡的作用機(jī)制。
　　本研究采用不同組織來(lái)源的五種腫瘤細(xì)胞:人乳腺癌細(xì)胞株(MCF-7)、人胃癌細(xì)胞株(BGC-823)、人肝癌細(xì)胞株(SMMC-7721)、人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株(NCI-H1668和NCI-H446)，以五種腫瘤細(xì)胞作為體外細(xì)胞模型，采用MTT法檢測(cè)三種喜樹堿衍生物在1μM到50μM濃度范圍條件下對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖作用的影響。MTT結(jié)果表明三種喜樹堿衍生物均可抑制不同腫瘤細(xì)胞系增殖，且促細(xì)胞凋亡作用呈濃度時(shí)間雙依賴特

3、點(diǎn)。但對(duì)于不同組織來(lái)源的細(xì)胞抑制強(qiáng)度不同，其中PR-HCPT對(duì)MCF-7細(xì)胞最為敏感，48h的半數(shù)抑制率為11.59μM。利用分子對(duì)接技術(shù)探究小分子衍生物和拓?fù)洚悩?gòu)酶之間的作用關(guān)系，分子對(duì)接結(jié)果表明三種喜樹堿衍生物與拓?fù)洚悩?gòu)酶在相同區(qū)域結(jié)合，且結(jié)合作用可能與兩者所形成的氫鍵有關(guān)。
　　通過(guò)Hochest33258染色觀察和流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，PR-HCPT可以誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡性死亡。HCPT作用于細(xì)胞后，可以看到細(xì)胞核固縮，

4、染色質(zhì)凝集和凋亡小體形成等細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)特點(diǎn)。用10μM和25μM的PR-HCPT處理MCF-7細(xì)胞后，細(xì)胞早期凋亡率由0.4％分別上升至72.2％和76.2％。運(yùn)用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建蛋白超表達(dá)細(xì)胞體系，蛋白質(zhì)印跡法測(cè)量喜樹堿衍生物作用前后關(guān)鍵蛋白的表達(dá)情況，WesternBlot結(jié)果顯示，PR-HCPT處理后的MCF-7細(xì)胞，NF-κB基因表達(dá)量顯著下調(diào)，IκB蛋白表達(dá)量上升，但PTEN蛋白和AKT蛋白兩者表達(dá)量并無(wú)明顯改變。三種喜樹堿