1、背景和目的:MicroRNAs作為小鏈非編碼RNAs參與到各種生物學(xué)過(guò)程,參與腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。部分腫瘤中發(fā)現(xiàn)miR-148b異常表達(dá),但是它在胰腺癌中的表達(dá)和生物學(xué)效應(yīng)尚不明確。
　　方法:實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)miR-148b在胰腺癌組織和細(xì)胞系中的表達(dá),通過(guò)χ2檢驗(yàn)來(lái)檢測(cè)miR-148b和臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。轉(zhuǎn)染miR-148b類(lèi)似物以上調(diào)其在胰腺癌細(xì)胞的表達(dá),觀察miR-148b對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖和成瘤性的影響。通過(guò)流式細(xì)

2、胞技術(shù)檢測(cè)凋亡和細(xì)胞周期,通過(guò)transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力改變,雙熒光報(bào)告基因分析驗(yàn)證miR-148b對(duì)AMPKα1的靶向調(diào)控作用,進(jìn)一步通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和westernblot檢測(cè)miR-148b以及AMPKα1siRNA對(duì)AMPK表達(dá)的影響。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和免疫組化檢測(cè)AMPKα1在胰腺癌中的表達(dá),進(jìn)一步通過(guò)沉默AMPKα1來(lái)評(píng)估AMPKα1對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖,凋亡,細(xì)胞周期,細(xì)胞侵襲和成瘤性的影響。

3、>　　結(jié)果:miR-148b在48例胰腺癌組織和5個(gè)胰腺癌細(xì)胞系中表達(dá)明顯低于癌周正常胰腺組織,其表達(dá)下調(diào)與腫瘤體積,TNM分期,淋巴結(jié)侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。功能學(xué)研究顯示增加miR-148b的表達(dá)能明顯抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯在S期。同時(shí),miR-148b能明顯抑制胰腺癌細(xì)胞的侵襲和裸鼠體內(nèi)成瘤。雙熒光素酶報(bào)告研究顯示miR-148bmimics能明顯降低AMPKα1的野生型3’UTR的熒光素酶活性,降

4、低AMPKα1在mRNA和蛋白的表達(dá)水平。同時(shí),AMPKα1在胰腺癌組織中高表達(dá),主要定位在癌細(xì)胞胞漿。這種高表達(dá)同miR-148b在胰腺癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性。而下調(diào)AMPKα1明顯抑制了胰腺癌細(xì)胞的增殖和成瘤,同時(shí)誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞的凋亡,細(xì)胞周期阻滯,和侵襲抑制。這種效應(yīng)同miR-148b的過(guò)表達(dá)效應(yīng)相一致。
　　結(jié)論:miR-148b通過(guò)靶向調(diào)控AMPKα1來(lái)抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖和侵襲,在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮負(fù)性抑制作用,靶向調(diào)