1、目的：乙酰膽堿受體四聚體前體α亞單位（pcDNA3.1-AchRα-BirA）重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至人胚腎細胞（HEK293）并在其細胞膜上獲得穩(wěn)定表達。為構(gòu)建乙酰膽堿受體四聚體并將其作為抗原用于檢測乙酰膽堿受體抗體的后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法：構(gòu)建重組質(zhì)粒載體pcDNA3.1-AchRα-BirA，將其轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細胞E. coli DH5α中。擴增培養(yǎng)E. coli DH5α，提取重組質(zhì)粒pcDNA3.1-AchRα-BirA，經(jīng)限

2、制性核酸內(nèi)切酶EcoRV單酶切后，采用低熔點瓊脂糖凝膠電泳檢測，初步確定提取到質(zhì)粒。設(shè)計引物，經(jīng)生物公司合成并測序，驗證其基因序列。將成功提取到的重組質(zhì)粒pcDNA3.1-AchRα-BirA，采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染至HEK293細胞。經(jīng)G418篩選后，形成集落狀抗性克隆細胞。將表達產(chǎn)物擴大培養(yǎng)，應用免疫熒光技術(shù)，以異硫氰酸熒光素（FITC）標記，經(jīng)熒光顯微鏡查看表達情況。
　　結(jié)果：電泳檢查發(fā)現(xiàn)了大小約為6964bp的條帶，并經(jīng)生