1、禽白血病是由禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus，ALV)引起的雞的腫瘤性疾病。它可以使雞直接發(fā)病，產生腫瘤而死亡;也可以導致感染雞產生免疫抑制，繼發(fā)多種病原的混合感染，使病雞對疫苗的免疫應答能力下降，嚴重影響雞的生產性能。2008年以來，禽白血病尤其是J亞群禽白血病在我國大部分省份不同程度的爆發(fā)給我國養(yǎng)禽業(yè)造成了很大的經濟損失。禽白血病目前沒有有效的防治措施。預防本病的主要方法是淘汰陽性雞，凈化種群。因此利用群特異性

2、或亞群特異性單克隆抗體(Monoc lonal Antibody, MAb)建立ALV抗原診斷方法對于臨床上ALV的診斷凈化、防控、流行病學監(jiān)測等具有重要意義。
　　p27蛋白作為ALV的群特異性抗原，因其序列高度保守并且含有許多易于被檢測的抗原位點而成為制備檢測抗體的首選抗原。本研究首先對p27蛋白進行原核表達與純化，利用雜交瘤技術制備了針對p27蛋白的4株MAb，分別命名為3A9、2E5、3D5、3H12。然后利用肽掃描(Pe

3、pscan)技術對p27蛋白的表位信息進行分析，得到一個線性p27蛋白表位181ppSAR185，該表位在ALV各個亞群之間高度保守，是群特異性表位。以制備的MAb2E5作為捕獲抗體，MAb3D5作為檢測抗體建立了禽白血病病毒群特異性抗原ELISA檢測方法。通過對各項反應條件的優(yōu)化，確立了該方法的最佳程序。該方法特異性好，可與家禽常見的A、B和J亞群ALV反應，但不與其他禽病病原如NDV、IBDV、MDV、AIV等反應。該方法對重組p2

4、7蛋白的最低檢測量為1.25ng/mL，敏感性略高于美國IDEXX Avian Leukosis Virus Antigen Test Kit(ALVAg)試劑盒。重復性實驗表明，同一樣品的批內和批間變異系數(shù)均小于10％。保存期實驗表明，該試劑盒在4℃保存一年后對陰陽性樣品的檢測結果仍然具有良好的穩(wěn)定性。臨床樣品檢測結果顯示，本實驗研制的試劑盒與美國IDEXX試劑盒對2555份泄殖腔拭子檢測結果的總符合率為96.32％;對1141份蛋清

5、樣品檢測結果的總符合率為97.20％。人工感染實驗表明，PCR檢測方法最早檢出陽性結果為攻毒后11日，本實驗研制的ELISA檢測試劑盒最早檢出陽性結果為攻毒后12日。
　　gp85蛋白在ALV各亞群之間具有高度的變異性，同源性很低，約為30％，具有亞群特異性。本研究首先對gp85蛋白進行原核表達與純化，制備了針對這個蛋白的MAb，命名為4A3。MAb4A3不能與ALV-A和ALV-B反應，但是能夠與不同國家、時間、地域分離的ALV

6、-J毒株發(fā)生特異性反應。然后利用肽掃描(Pepscan)技術鑒定出gp85蛋白的一個線性表位134AEAELRDFI142，該表位在不同的ALV-J毒株之間高度保守，是亞群特異性表位。針對gp85蛋白的MAb和表位的研究為接下來建立以MAb為基礎的J亞群ALV抗原診斷方法奠定了良好的基礎。
　　本研究共得到4株抗p27蛋白和1株抗ALV-J gp85蛋白的MAbs，鑒定出1個p27蛋白抗原表位和1個gp85蛋白抗原表位，為進一步研