1、博士學(xué)位論文基于HepG2細(xì)胞膜表面HSP70的免疫應(yīng)用研究ImmunologicalApplicationResearchBasedonHeatShockProtein70ontheSurfaceofHepG2Cells作者學(xué)科、，當(dāng)_r姓名：專業(yè)：Izl丐：指導(dǎo)教師：儉丞堊塾援完成日期：至Q!墨生墨旦大連理工大學(xué)DalianUniversityofTechnology大連理]：大學(xué)博士學(xué)位論文摘要抗腫瘤藥物對機體正常細(xì)胞的細(xì)胞毒性及

2、腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性機制始終是抗腫瘤治療的主要障礙?？鼓[瘤靶向藥物雖然有較低的細(xì)胞毒性和可選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞的作用，但多數(shù)靶向藥物通常基于腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞間差異性抗原研制，故在腫瘤細(xì)胞發(fā)生抗原漂移和抗原調(diào)變時常使抗腫瘤靶向藥物的療效減弱，甚至失去療效。在探索抗腫瘤治療途徑過程中，人們發(fā)現(xiàn)熱療法可在不傷害機體正常細(xì)胞的情況下選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞，而且還可通過熱誘導(dǎo)作用使腫瘤細(xì)胞的免疫原性增強，從而有助于機體免疫系統(tǒng)對腫瘤細(xì)胞的識別，進而增強

3、機體免疫系統(tǒng)對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。然而，單純依靠熱療方法進行抗腫瘤治療，存在療效低、治療不徹底等缺點，因此熱療法通常與其它抗腫瘤治療方法聯(lián)合使用。熱休克蛋白(HeatShockProteins，HSPs)是高度保守的細(xì)胞蛋白質(zhì)家族之一，腫瘤熱療、化療等因素都可誘導(dǎo)產(chǎn)生熱休克蛋白。HSPs可通過多肽結(jié)合閡與腫瘤細(xì)胞內(nèi)不同的腫瘤相關(guān)抗原結(jié)合形成復(fù)合物并激活免疫系統(tǒng)。有研究表明，腫瘤細(xì)胞內(nèi)HSPs水平顯著高于正常組織細(xì)胞；在腫瘤細(xì)胞膜表面可檢

4、測到HSPs，而相同條件下正常細(xì)胞膜表面卻檢測不到HSPs。但是，腫瘤細(xì)胞經(jīng)熱誘導(dǎo)后細(xì)胞膜表面蛋白水平是否存在規(guī)律性變化以及能否用于抗腫瘤治療鮮見報道。為此，本研究首先考察經(jīng)熱誘導(dǎo)后人肝癌HepG2細(xì)胞膜表面蛋白水平是否存在規(guī)律性變化。由于HSP70是腫瘤細(xì)胞膜表面的主要熱誘導(dǎo)蛋白，故先采用流式細(xì)胞術(shù)等方法對熱誘導(dǎo)后HepG2細(xì)胞膜表面HSP70水平的動態(tài)變化情況進行研究。在此基礎(chǔ)上，采用經(jīng)熱誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞免疫BALB／c小鼠，通

5、過免疫學(xué)和基因工程的方法構(gòu)建單鏈抗體文庫，然后利用核糖體展示和免疫親和篩選方法，獲得與熱誘導(dǎo)后HepG2細(xì)胞結(jié)合的特異性單鏈抗體，進而構(gòu)建特異性單鏈抗體重組免疫毒素基因并對其表達的融合蛋白特異性、親和性以及抗腫瘤活性進行檢測。研究顯示HepG2細(xì)胞膜表面HSP70水平在42℃熱誘導(dǎo)后37℃恢復(fù)培養(yǎng)12h出現(xiàn)峰值，同時細(xì)胞膜表面可檢測到HSP70的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)顯著增加(由785％增加到1511％)。采用核糖體展示技術(shù)成功篩選獲得與熱誘導(dǎo)后H