1、熱應激是現(xiàn)代肉雞生產(chǎn)中普遍關(guān)注的關(guān)鍵問題，但機體的熱應激分子調(diào)控機制尚不完全清楚。目前多數(shù)研究僅限于個別基因的功能表達或通路分析上。本研究通過構(gòu)建肉雞熱應激模型，應用蛋白質(zhì)組學和代謝組學高通量分析技術(shù)，在整體水平系統(tǒng)分析肉雞熱應激下體內(nèi)蛋白質(zhì)及小分子代謝產(chǎn)物組成的變化及其整體代謝通路，結(jié)合生物信息學方法，對肉雞熱應激分子機制進行深入研究。主要內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　1、肉雞熱應激模型構(gòu)建:選擇21d健康A(chǔ)A雄性肉雞144只，隨機分成

2、對照組（26±1℃）和持續(xù)高溫組（32±1℃），每組72只，飼養(yǎng)至42日齡，測定體溫、生產(chǎn)性能與血液生化指標。結(jié)果表明:在21-42d持續(xù)3周高溫熱暴露分別降低肉雞的平均日增重60％(P＜0.01)和平均日采食量42％(P＜0.01)，提高料重比46％(P＜0.01);持續(xù)32℃熱暴露72 h后，肉雞體溫顯著升高(P＜0.05)，血液中TG顯著降低(P＜0.05)，而LDL-C和GLU顯著升高(P＜0.05);持續(xù)32℃熱暴露1周后，肉

3、雞體溫顯著升高(P＜0.05)，血液中AST和LDL-C水平顯著升高(P＜0.05)，GLU和HDL-C增加達到極顯著水平(P＜0.01)。
　　2、基于質(zhì)譜的肉雞肝臟蛋白質(zhì)組鑒定方法研究:試驗開始72 h時，在熱應激模型試驗肉雞中隨機抽取AA雄性肉雞18只，對照組（26±1℃）和持續(xù)高溫組（32±1℃）各9只進行屠宰取肝樣用于蛋白質(zhì)組鑒定和SWATH定量分析。結(jié)果表明，通過丙酮沉積、延長洗脫時間和質(zhì)譜“分級”顯著提高了雞肝蛋白質(zhì)

4、的鑒定數(shù)量，實現(xiàn)在165min有效時間內(nèi)一次鑒定到4271個蛋白及對應的36073條多肽，且50％以上的蛋白有超過5段的多肽被鑒定到，被鑒定到的蛋白分別參與糖類代謝、脂類代謝等328個重要代謝通路，該研究確定了適合雞肝等復雜樣品內(nèi)的蛋白質(zhì)鑒定策略。
　　3、非標定量技術(shù)解析肉雞肝蛋白的熱應激響應機制:本研究利用高通量、非標記的SWATH定量技術(shù)，在雞肝中成功鑒定到257個與熱應激密切相關(guān)的蛋白，GO注釋和通路分析表明，這些蛋白主要

5、涉及機體氧化還原過程、蛋白質(zhì)折疊、信號傳導及負凋亡調(diào)控等生物功能，參與能量代謝通路、氨基酸代謝通路、脂類代謝通路和免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的代謝通路。同時對GSTA2、NDUFA8、CYP3A7、FADS1和HSPA5五種蛋白質(zhì)表達水平進行MRM和Western blotting驗證，結(jié)果表明這5種蛋白的變化趨勢與SWATH分析結(jié)果一致，證實了SWATH定量蛋白質(zhì)組學數(shù)據(jù)可靠。
　　4、基于代謝組學的肉仔雞熱應激分子機制研究:試驗開始70-7

6、4 h時，在熱應激模型試驗肉雞隨機選擇AA雄性肉雞20只，對照組（26±1℃）和持續(xù)高溫組（32±1℃）各10只收集糞樣用于代謝組學分析。本試驗建立了基于UPLC/MS的代謝組學分析糞樣中代謝產(chǎn)物的方法，研究了肉雞熱應激與對照組的糞樣中代謝譜差異，發(fā)現(xiàn)10個可能成為潛在的可有效區(qū)分肉雞熱應激組和正常組的生物標志物，這些標志物主要涉及糖酵解和糖異生作用、脂類代謝、氨基酸代謝等代謝途徑。
　　綜合上述結(jié)果及國內(nèi)外熱應激研究進展，深入分

7、析發(fā)現(xiàn)，熱應激下肉雞可能是通過以下途徑緩解應激:1）抑制與磷酸化修飾相關(guān)的ERK1/2信號通路，調(diào)節(jié)細胞增殖、分化與凋亡修復熱應激損傷;2）下調(diào)ACOT1和ACOT8表達，抑制脂肪酸合成;3）上調(diào)BHMT和下調(diào)GAMT表達促進蛋氨酸合成，清除應激生成的ROS;4）上調(diào)P2RX1和下調(diào)KIT表達提高神經(jīng)酰胺水平，上調(diào)DDC和PAH和下調(diào)COMT表達，促進兒茶酚胺合成，提高神經(jīng)興奮以增強抗應激能力;5）上調(diào)HSP90AA1和LUM等表達，誘