1、海洋生物是人類食物的重要來源。對蝦是其中一種重要的海水經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖動(dòng)物，然而對蝦養(yǎng)殖業(yè)易受到多種細(xì)菌和病毒的感染，遭受到巨大損失。因此，研究對蝦先天免疫機(jī)理，不僅可以為防治蝦病提供基礎(chǔ)理論指導(dǎo)，還能與模式生物的相關(guān)研究進(jìn)行比較，具有重要的理論意義與應(yīng)用價(jià)值。
　　細(xì)胞是最小的生命系統(tǒng)組成單位，在其內(nèi)部的正?；顒?dòng)與秩序的維持中，胞內(nèi)的銜接蛋白(Adaptor protein)起到不可忽視的作用。其正常的免疫活動(dòng)，如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，細(xì)胞免疫等等

2、，都依賴于接頭蛋白才能有條不紊的進(jìn)行。因此，研究對蝦接頭蛋白在免疫過程中的功能對于我們進(jìn)一步了解對蝦的先天免疫機(jī)制和細(xì)胞中銜接蛋白的功能有重要的作用。
　　Syntenin蛋白是一種含有兩個(gè)串聯(lián)的PDZ(首次在突觸后密度蛋白PSD-95，DlgA和ZO-1中報(bào)道的重復(fù)序列)結(jié)構(gòu)域的多功能的胞質(zhì)內(nèi)接頭蛋白，能夠參與到細(xì)胞粘附，遷移，分化，凋亡以及在脊椎動(dòng)物的病毒的免疫反應(yīng)過程中。但是，目前關(guān)于Syntenin蛋白在無脊椎動(dòng)物的病毒免

3、疫和細(xì)菌免疫方面的功能和具體作用機(jī)理沒有研究。本文選取了日本囊對蝦（Marsupenaeus japonicus）做為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，克隆得到了Syntenin的同源基因，命名為MjSyn，并研究了該基因及其編碼的蛋白在對蝦免疫反應(yīng)中的功能及其作用機(jī)理。MjSyn的cDNA全長共1223bp，其完整開放閱讀框?yàn)?63 bp，共編碼320個(gè)氨基酸。結(jié)構(gòu)域分析發(fā)現(xiàn)MjSyn共包含兩個(gè)PDZ結(jié)構(gòu)域，一個(gè)N端區(qū)域和一個(gè)C端區(qū)域。MjSyn在對蝦各個(gè)組

4、織中均有分布，并且在受到金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），鰻弧菌（Vibrio anguillarum）和白斑綜合癥病毒(white spot syndrome virus，WSSV)刺激后，在不同時(shí)間點(diǎn)均有不同程度的上調(diào)表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，通過RNAi方法干擾對蝦體內(nèi)MjSyn的表達(dá)量后，對蝦對于細(xì)菌感染的清除能力下降了。利用血細(xì)胞吞噬熒光細(xì)菌的方法，表明干擾MjSyn影響了細(xì)胞對于細(xì)菌的吞噬能力，進(jìn)而影響了對

5、蝦對細(xì)菌的清除能力。通過進(jìn)一步篩選吞噬相關(guān)基因，我們發(fā)現(xiàn)干擾MjSyn后，日本對蝦中的Calnexin（MjCnx）的mRNA和蛋白的表達(dá)都受到抑制，這表明MjSyn可能通過影響calnexin相關(guān)途徑來影響細(xì)胞的吞噬過程。
　　在對蝦抗病毒免疫方面的研究中，我們發(fā)現(xiàn)干擾MjSyn后，病毒蛋白VP28在對蝦體內(nèi)的復(fù)制減少。而過表達(dá)MjSyn后，病毒蛋白VP28的復(fù)制增加。體外pull-down和體內(nèi)Co-IP實(shí)驗(yàn)證明，全長MjSy

6、n可以結(jié)合病毒的囊膜蛋白VP24、VP28和VP26。全長蛋白中，結(jié)構(gòu)域1+2與結(jié)構(gòu)域C(CTD)都能夠分別結(jié)合這三種病毒蛋白。另外，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)對蝦受到病毒刺激后，MjSyn向細(xì)胞膜遷移，呈極化分布，F(xiàn)-actin的遷移趨勢與MjSyn相吻合，因此兩者的共定位增加。值得注意的是，在病毒刺激后的血淋巴中能夠檢測到分泌出細(xì)胞外的MjSyn及VP28蛋白。這些結(jié)果表明，MjSyn通過結(jié)合病毒蛋白和調(diào)控F-actin的分布，促進(jìn)病毒釋放的過程來參