1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)是單端孢霉烯族毒素之一，廣泛存在于谷物和飼料中，嚴重危害人類和動物的健康。目前的檢測方法操作繁瑣，大多需要專門的儀器進行配套檢測，無法滿足快速、簡便、現(xiàn)場檢測的要求。本文以多克隆抗體和膠體金合成標(biāo)記技術(shù)為基礎(chǔ)，根據(jù)免疫層析的原理，建立了食品中DON膠體金免疫快速檢測方法。 通過DCC法合成DON完全抗原，DON與BSA的初始摩爾比為50：1，得到DON完全抗原中DON與BSA的摩爾比為9.7：1。通過

2、紅外光譜掃描以及ELISA實驗驗證了DON—BSA的偶聯(lián)成功。將DON—BSA免疫新西蘭大白兔，得到抗體的最高效價為12800，抑制率IC50為10Vg/mL，與T-2毒素、NIV的交叉反應(yīng)率分別為9.1％，4.9％。 采用檸檬酸三鈉還原法成功制備了粒徑為10nnl和20nm的膠體金，并在紫外圖譜上進行了表征。膠體金標(biāo)記抗體的最適pH為9.0，最適抗體加入量為0.066mg/mL、0.072mg/mL。膠體金標(biāo)記抗血清得到免疫膠

3、體金探針，膠體金、抗體溶液、免疫探針復(fù)合物做紫外掃描，280nm附近有蛋白特征峰出現(xiàn)，與膠體金復(fù)合后，原出現(xiàn)在520nin處的膠體金的特征峰，峰值增高，并平移至540nm附近，證明大分子蛋白抗體與膠體金偶聯(lián)成功。 標(biāo)記前后的抗體蛋白紅外光譜掃描的結(jié)果表明，標(biāo)記前后抗體蛋白的特征基團結(jié)構(gòu)沒有發(fā)生明顯的變化。對抗體探針進行熒光光譜掃描分析，膠體金對抗體蛋白的內(nèi)源熒光有猝滅作用，并且隨著膠體金濃度的增加，抗體的熒光強度呈現(xiàn)有規(guī)律的降低

4、，發(fā)射光的位置不變。 以膠體金標(biāo)記多克隆抗體作為探針，DON—BSA作為競爭抗原，構(gòu)建了膠體金免疫檢測體系(GICA)。確定最佳包被抗原濃度為10μg/mL，緩沖液體系：10％甲醇+0.05％吐溫20的pH7.4PBS溶液，膠體金的最佳粒徑20nm左右。GICA目測檢出限為1mg/kg，檢測時間為10～15min。方法的重復(fù)性良好。方法的穩(wěn)定性良好，試紙條室溫保存3個月，4℃保存6個月。對自然污染的樣品進行ELISA和GICA檢