1、目的：合成乳糖化-去甲斑蝥素(lactosyl-norcantharitin,Lac-NCTD)磷脂復合物,從而提高Lac-NCTD的脂溶性,將其通過逆向蒸發(fā)法制備脂質(zhì)體,并利用羧甲基殼聚糖(carboxymethyl chitosan,CMCT)與脂質(zhì)體表面的靜電吸附作用,制備Lac-NCTD磷脂復合物pH敏感型脂質(zhì)體,以期其在弱酸性的腫瘤部位主動釋藥,增強Lac-NCTD的抗腫瘤活性。
　　 方法：⑴通過溶劑蒸發(fā)法合成Lac

2、-NCTD磷脂復合物,以復合率為指標,考察反應溶劑、Lac-NCTD投藥濃度、Lac-NCTD與磷脂投料比、反應溫度、反應時間對復合率的影響,通過單因素和正交試驗設計優(yōu)化制備工藝,紅外光譜分析(FT-IR)、差示掃描量熱分析(DSC)和核磁共振分析(1H-NMR)表征磷脂復合物結構,測定磷脂復合物的表觀油水分配系數(shù),通過高效液相色譜(HPLC)考察磷脂復合物的性質(zhì)。⑵分別以Lac-NCTD和Lac-NCTD磷脂復合物為原料藥,分別采用逆

3、向薄膜蒸發(fā)法蒸發(fā)法和逆向蒸發(fā)法制備脂質(zhì)體,通過均勻設計優(yōu)化脂質(zhì)體制備工藝,考察脂質(zhì)體包封率、載藥量、粒徑分布及Zeta電位。⑶通過CMCT與Lac-NCTD磷脂復合物脂質(zhì)體表面的靜電吸附作用,使CMCT包裹在脂質(zhì)體表面,制得pH敏感型脂質(zhì)體,并考察其與未包裹CMCT的脂質(zhì)體在不同介質(zhì)中的體外釋放性質(zhì),與Lac-NCTD脂質(zhì)體的釋放特性進行比較。⑷通過MTT法考察Lac-NCTD、兩種空白脂質(zhì)體與兩種載藥脂質(zhì)體對人體肝癌細胞HepG2的細

4、胞毒作用。⑸采用HPLC法評價HepG2細胞對Lac-NCTD及其脂質(zhì)體的攝取過程。⑹建立H22肝癌細胞小鼠荷瘤模型考察脂質(zhì)體在體內(nèi)抗腫瘤活性。⑺通過熒光染料Cy-7分子結構中的羧基與羧甲基殼聚糖中的伯胺發(fā)生反應,用Cy-7標記CMCT,制備Cy-7熒光標記的pH敏感型乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物脂質(zhì)體,通過小動物活體成像儀,采集熒光信號,考察該脂質(zhì)體在小鼠體內(nèi)的靶向性。
　　 結果：①Lac-NCTD磷脂復合物的復合率為97.

5、2±2.01％,其表觀油水分配系數(shù)為Lac-NCTD的135倍,脂溶性顯著改善。FT-IR、DSC及1H-NMR表征磷脂復合物結構得,磷脂復合物是由氫鍵締合產(chǎn)生的復合物,其不同于藥物與磷脂的普通物理混合物；HPLC檢測結果顯示Lac-NCTD磷脂復合物具有與Lac-NCTD相同的保留時間,表明磷脂復合物也不是一種全新化合物。②磷脂復合物脂質(zhì)體的平均包封率為70.00±1.30％,載藥量為2.24±0.43％,平均粒徑為47.18±4.1

6、6nm,粒徑跨距為0.70±0.07,Zeta電位為-26.0±2.97mV,電鏡顯示其形態(tài)圓整；Lac-NCTD脂質(zhì)體包封率為38.12±1.12％,載藥量為1.22±0.21％,平均粒徑為83.14±9.64nm,粒徑跨距為0.63±0.07,Zeta電位為-11.0±2.42mV。③Lac-NCTD脂質(zhì)體體外釋藥符合Higuchi方程；pH敏感型脂質(zhì)體體外釋藥符合Weibull方程,并且在pH5.9～7.4的介質(zhì)中表現(xiàn)出顯著的pH

7、依賴性和爆破釋放效應。④與Lac-NCTD、Lac-NCTD脂質(zhì)體相比,pH敏感型脂質(zhì)體在體外對腫瘤細胞HepG2的親和性更好,細胞毒作用更顯著。⑤體內(nèi)抑瘤實驗表明,pH敏感型脂質(zhì)體可以更好地抑制H22腫瘤的生長,保護免疫器官。⑥pH敏感型脂質(zhì)體可以靶向聚積在小鼠肝臟和腫瘤部位,有很好的靶向作用,從而減小藥物毒副作用,提高抗腫瘤效果。
　　 結論：優(yōu)化的藥物磷脂復合物制備工藝簡單易行,成本低,復合率高,可以顯著提高藥物脂溶性,從