1、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)等心血管疾病是發(fā)病率最高的疾病之一，血管內(nèi)皮細(xì)胞(endotheial cells，EC)和血管平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cells，SMC)的相互作用失衡是發(fā)病的重要原因。為了更好地研究其發(fā)病機(jī)制和防治措施，構(gòu)建合適的動(dòng)脈血管壁細(xì)胞相互作用模型成為研究熱點(diǎn)。目前，細(xì)胞的聯(lián)合培養(yǎng)模型多為混合培養(yǎng)，不同細(xì)胞相互干擾，很難準(zhǔn)確得到EC和SMC之間的作用機(jī)制，無法精確模擬細(xì)胞的

2、微環(huán)境，也無法實(shí)現(xiàn)動(dòng)態(tài)檢測(cè)活細(xì)胞內(nèi)單細(xì)胞及亞細(xì)胞水平的變化。因此，本文提出基于微流控芯片構(gòu)建單細(xì)胞水平的EC和SMC聯(lián)合培養(yǎng)模型。
　　采用酶解法和組織貼塊法分別分離培養(yǎng)人臍帶血管EC與SMC，并經(jīng)過特異抗體的免疫組織化學(xué)染色對(duì)其進(jìn)行鑒定;基于流體力學(xué)原理設(shè)計(jì)微流控內(nèi)部通道結(jié)構(gòu)和細(xì)胞培養(yǎng)腔室，采用改進(jìn)的U型陷阱進(jìn)行細(xì)胞抓捕;針對(duì)EC和SMC兩種細(xì)胞在血管中的層次結(jié)構(gòu)，分別設(shè)計(jì)了直接接觸和非直接接觸兩種方式。選取PDMS(ployd

3、imethylsiloxane)為材料，采用模塑法制作兩種不同方式的芯片。分別在兩種芯片內(nèi)進(jìn)行EC和SMC抓捕與培養(yǎng)，調(diào)整細(xì)胞濃度與灌流速度，通過顯微鏡動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞的捕獲與生長(zhǎng)狀態(tài)。
　　結(jié)果顯示，EC和SMC細(xì)胞分離純化純度99％以上;通過本文設(shè)計(jì)的微流控芯片，在細(xì)胞濃度為3×105個(gè)/mL，流速為50μL/h時(shí)，能有效地捕捉到單細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)兩種不同接觸方式的聯(lián)合培養(yǎng)。說明本文成功建立了單細(xì)胞水平的EC-SMC聯(lián)合培養(yǎng)的微流控芯片