冷凍前后臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)造血功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:研究冷凍前后臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Human umbilical cord mesenchymal stromal cells hUC-MSCs)的生物學(xué)特性及其對(duì)造血干/祖細(xì)胞體外擴(kuò)增的影響。
  方法:通過(guò)組織塊培養(yǎng)法從臍帶中分離獲得 hUC-MSCs,觀察其生長(zhǎng)形態(tài),取傳代培養(yǎng)至第3-6代,冷凍1、3月后復(fù)蘇。分別收集冷凍前后第三代細(xì)胞:
 ?、派L(zhǎng)動(dòng)力學(xué)特點(diǎn);
 ?、屏魇綑z測(cè)免疫表型;
 ?、嵌ㄏ蚍只T

2、導(dǎo)成骨、成脂肪細(xì)胞;
  ⑷研究其對(duì)造血干/祖細(xì)胞體外擴(kuò)增的支持作用。
  A組:?jiǎn)渭児撬鑶蝹€(gè)核細(xì)胞(Bone marrow nuclear cells BMNCs);
  B組:BMNCs加人包皮成纖維細(xì)胞;
  C組:BMNCs加骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞;
  D組: BMNCs加冷凍前;
  E組:BMNCs冷凍加后hUC-MSCs。
  分別于第0d,14d,28d,35d甲基纖維素法分析造血干

3、/祖細(xì)胞集落的增殖狀態(tài)及細(xì)胞因子SDF-1、SCF、TPO、IL-6,11的含量變化。
  結(jié)果:
 ?、爬鋬銮?、后P3和P6收獲細(xì)胞的拒染率分別>93.8%和>92.4%;臍帶間質(zhì)原代培養(yǎng)收獲的細(xì)胞數(shù)不同,其生長(zhǎng)生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)差別較大;
 ?、迫四殠чg質(zhì)細(xì)胞具有間充質(zhì)細(xì)胞部分特征;不同的是CD34為24.2%;內(nèi)皮標(biāo)記CD31為13.3%;
 ?、抢鋬銮昂缶上虺芍⒊晒羌?xì)胞分化;
 ?、炔煌瑫r(shí)間點(diǎn)造血干

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