1、分類號：Q952學校單位代碼：10446碩士學位論文論文題目：論文題目：大田軟海綿酸對人肺腺癌細胞大田軟海綿酸對人肺腺癌細胞A549增殖的影響增殖的影響及凋亡誘導作用研究及凋亡誘導作用研究研究生姓名：呂麗麗學科、專業(yè)：動物學研究方向：動物分子生物學導師姓名、職稱：王仁君教授趙云峰教授論文完成時間：2014年3月曲阜師范大學2011級碩士畢業(yè)論文I摘要研究背景：研究背景：近年來，有害赤潮在我國和世界各國沿海頻繁發(fā)生，嚴重破壞了海洋生態(tài)系統(tǒng)

2、的穩(wěn)定，并威脅海洋漁業(yè)安全和人類健康。特別是部分赤潮藻產(chǎn)生的赤潮毒素直接威脅魚類安全及人類身體健康。腹瀉性貝毒毒素（DSP）作為一類主要的赤潮藻毒素，能通過食物鏈富集作用或直接引發(fā)人類中毒，產(chǎn)生嘔吐，腹瀉等癥狀。DSP的主要活性成分大田軟海綿酸（OA）是由海洋甲藻產(chǎn)生的一種疏水性脂肪酸聚醚。已經(jīng)證實OA具有誘導癌變和促進凋亡雙重效應(yīng)。有研究表明OA能夠引起人肝癌細胞，人結(jié)腸癌細胞，人神經(jīng)母細胞瘤細胞等癌細胞系凋亡。目前利用相關(guān)細胞系進行

3、OA毒性檢測并指導赤潮防治方面的研究報道較多。根據(jù)OA能夠誘導癌細胞凋亡這一特點，本文選取了非OA靶器官瘤細胞系A(chǔ)549細胞作為研究對象，意在研究OA對A549細胞系是否同樣具有凋亡誘導作用。本文通過研究大田軟海綿酸對人肺腺癌細胞A549增殖的影響，并進行形態(tài)學觀察及亞顯微水平分析，最終確定OA對A549細胞系是否具有生長抑制作用并探討其原因，以期在細胞水平上為肺癌治療提供一定的理論基礎(chǔ)，為肺腺癌的治療尋求新的藥物。研究方法：研究方法：

4、1.MTT法及臺盼藍拒染試驗（TBET）進行細胞生長量的測定，分析OA對A549細胞增殖的影響。2.Giemsa染色法、蘇木精伊紅染色法、倒置相差顯微鏡觀察、吖啶橙染色法、H33258染色法等實驗觀察OA對A549細胞顯微水平形態(tài)學方面的影響。3.透射電鏡在亞顯微水平觀察A549細胞的變化情況。4.流式細胞術(shù)檢測細胞周期變化情況。5.分光光度法測定Caspase酶活變化情況。研究結(jié)果：研究結(jié)果：1.MTT實驗及臺盼藍拒染試驗結(jié)果顯示：O

5、A作用于A549細胞后，細胞數(shù)目呈劑量時間依賴性減少，表明OA能抑制A549細胞的增殖。2.形態(tài)學實驗觀察發(fā)現(xiàn)：經(jīng)34ngmL及68ngmLOA處理48h后，A549細胞部分細胞間接觸消失，胞體變圓，膜皺縮，部分細胞懸浮脫離支持物，細胞核凝集破碎，產(chǎn)生凋亡小體，出現(xiàn)明顯的細胞凋亡現(xiàn)象，且該現(xiàn)象有一定的劑量依賴性。3.細胞超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果顯示：細胞表面微絨毛消失，細胞內(nèi)染色質(zhì)凝集、彎曲，趨邊呈新月形帽狀結(jié)構(gòu)，細胞內(nèi)空泡化現(xiàn)象明顯，可見清晰