1、南方醫(yī)科大學(xué)2010級碩士學(xué)位論文OAZl基因?qū)β０籽562細(xì)胞紅系分化及凋亡作用的研究Effectofornithinedecarboxylaseantizyme1ontheerythroiddifferentiationandapoptosisofCMLcelllineK562課題來源：國家自然科學(xué)基金(No30901757)廣東省自然科學(xué)基金((No10151008004000028)學(xué)位申請人吳兵平導(dǎo)師姓名馬文麗教授專業(yè)名

2、稱生物化學(xué)與分子生物學(xué)培養(yǎng)類型非定向培養(yǎng)層次碩士所在學(xué)院基因工程研究所2013年月日廣州摘要融合蛋白具有明顯增高的酪氨酸激酶活性，自發(fā)通過多條途徑進(jìn)行信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，干擾了正常的細(xì)胞程序，與后期細(xì)胞分化的抑制和對細(xì)胞凋亡的耐受直接相關(guān)，是CML疾病發(fā)生重要原因。隨著腫瘤發(fā)病學(xué)的深入研究，誘導(dǎo)分化療法成為腫瘤治療學(xué)的新思路。對人急性髓性白血病和骨髓增生異常綜合征的誘導(dǎo)分化治療上已獲得確切療效并進(jìn)入臨床研究階段，而目前對慢性髓性白血病進(jìn)行誘導(dǎo)分化

3、治療的研究還處于起步階段。K562細(xì)胞是體外研究白血病惡性表達(dá)調(diào)控的良好模型，可被多種誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)向良性方向分化，研究證實(shí)氯化高鐵血紅素(Hemin)對其具有特異的紅系誘導(dǎo)分化作用。應(yīng)用馬文麗等創(chuàng)建的RDPCR技術(shù)篩選Hemin誘導(dǎo)前后細(xì)胞問差異表達(dá)cDNA片段，提示OAZl與K562分化存在相關(guān)性，但其確切功能及機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。此外，本實(shí)驗(yàn)過程中亦發(fā)現(xiàn)OAZl對K562細(xì)胞具有潛在的誘導(dǎo)凋亡作用。因此，本課題旨在明確OAZI

4、對慢粒自血病K562細(xì)胞紅系分化、凋亡的作用及分子機(jī)制，為以O(shè)AZl為靶點(diǎn)的CML治療提供理論依據(jù)。研究方法：構(gòu)建框移位點(diǎn)突變的OAZl過表達(dá)慢病毒載體pLVXNeo—OAZlIRESZsGreen(OAZl為人工合成目的片段687bp，合成時(shí)在框移位點(diǎn)處直接設(shè)置一個(gè)位點(diǎn)的缺失突變TCcTGATGTccGATG)，包裝病毒并感染K562細(xì)胞，G418藥物或流試細(xì)胞分選構(gòu)建K562／OAZl、K562／GFP穩(wěn)轉(zhuǎn)株，采用RealtimeR

5、TPCR和Westernblot技術(shù)驗(yàn)證OAZ1過表達(dá)效果。收集各組細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)組K562／OAZl、空對照組K562／GFP和未處理組K562)，F(xiàn)ACS檢測K562細(xì)胞早期紅系表面標(biāo)志抗原CD71和中晚期紅系標(biāo)志物血型糖蛋白A(glycophorin，GPA)，結(jié)合聯(lián)苯胺染色分析OAZl過表達(dá)對K562細(xì)胞紅系分化的作用。與此同時(shí)，我們對比Heroin誘導(dǎo)組，檢測與K562細(xì)胞紅系分化、癌變的關(guān)鍵基因(GATAl、BCR／ABL、TG