1、背景和目的:缺血性腦卒中是危害人類(lèi)健康的常見(jiàn)疾病。既往研究發(fā)現(xiàn)缺血區(qū)域的血管新生對(duì)恢復(fù)神經(jīng)功能至關(guān)重要。脂聯(lián)素是一種主要由脂肪細(xì)胞分泌的激素,有抗炎和抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用,對(duì)缺血性腦損傷具有保護(hù)作用,但脂聯(lián)素在抗缺血損傷中的機(jī)制目前仍不明確。
　　本研究運(yùn)用小鼠腦缺血模型,觀察脂聯(lián)素、AdipoR1、AdipoR2在缺血腦組織中的表達(dá);通過(guò)腺相關(guān)病毒載體基因治療的方法,觀察腦缺血模型中脂聯(lián)素對(duì)血管新生的影響,闡述脂聯(lián)素在腦缺血中的

2、作用機(jī)制。
　　方法:(1)60只CD-1小鼠行tMCAO術(shù),運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR,Westernblot和免疫組化的方法觀察小鼠腦缺血/再灌注后1小時(shí)、4小時(shí)、1天、3天、7天時(shí)腦內(nèi)脂聯(lián)素、脂聯(lián)素受體的表達(dá)。(2)120只小鼠分別接受AAV-GFP、AAV-APN或生理鹽水腦定位注射治療,7天后行tMCAO術(shù),觀察脂聯(lián)素對(duì)腦缺血/再灌注小鼠腦萎縮程度、血管新生、P-AMPK及VEGF表達(dá)的影響。(3)30只APN組小鼠在tMCAO

3、術(shù)前,術(shù)后腹腔注射AMPK抑制劑Compound C,觀察腦缺血/再灌注后腦萎縮程度、血管新生、P-AMPK及VEGF的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:(1)缺血/再灌注后,在小鼠缺血側(cè)腦組織中脂聯(lián)素蛋白表達(dá)量增加,缺血中心區(qū)的脂聯(lián)素蛋白表達(dá)量高于缺血周邊區(qū),且脂聯(lián)素的表達(dá)僅位于血管內(nèi)皮細(xì)胞。缺血前后腦組織中脂聯(lián)素mRNA表達(dá)水平無(wú)明顯變化。(2)缺血/再灌注后,在缺血側(cè)腦組織中AdipoR1的蛋白和mRNA表達(dá)量增高,缺血中心區(qū)和缺血周邊

4、區(qū)AdipoR1蛋白的表達(dá)量相似;腦血管內(nèi)皮細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞中均有AdipoR1的表達(dá)。缺血前、后的腦組織中均未見(jiàn)AdipoR2的表達(dá)。(3)APN組小鼠缺血側(cè)大腦半球萎縮程度為7.9±0.6％,明顯小于生理鹽水組(20.3±1.1％)和GFP組(19.8±0.3％)(P＜0.01)。APN組缺血周邊區(qū)血管密度為199±5/mm2,高于生理鹽水組(148±4/mm2)和GFP組(151±4/mm2)(P＜0.05)。(4)

5、缺血/再灌注后,APN組小鼠P-AMPK、VEGF的表達(dá)量在缺血側(cè)腦組織中均增高(p＜0.01),而Total AMPK的蛋白表達(dá)量在缺血前后無(wú)明顯差異。(5)APN組小鼠經(jīng)APMK抑制劑Compound C處理后,缺血側(cè)大腦半球萎縮程度(14.7±2.1％)大于對(duì)照組(7.7±1.8％)(P＜0.05);缺血周邊區(qū)血管計(jì)數(shù)(109±4/mm2)明顯少于對(duì)照組(200±6/mm2)(p＜0.01);缺血側(cè)腦組織中P-AMPK蛋白表達(dá)量、