1、目的：研究淫羊藿苷在骨壞死微環(huán)境中對狗骨髓間充質干細胞(BMSCs)增殖與成骨性分化的影響。
　　 方法：12月齡清潔級健康雜種犬，雌雄不限，體重15-20Kg。利用液氮冷凍法制作狗股骨頭壞死模型，造模后2周于髂嵴上穿刺抽取骨髓10 mL，利用犬單個核細胞分離液分離單核細胞層細胞，常規(guī)傳代培養(yǎng)犬BMSCs。同時處死實驗犬，取出壞死的股骨頭，無菌條件下切成小塊，放入10％FBS的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每隔3天換液1次，并收集壞死骨

2、培養(yǎng)液。取第2代細胞進行實驗，更換含有5％壞死骨培養(yǎng)液的條件培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中淫羊藿苷終濃度分別為2.58、4.18、6.77、10.95、17.72μg/ml。增殖分析采用MTT法，于成骨性誘導培養(yǎng)第7天測細胞外堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性，第8天進行細胞ALP染色，第14天進行茜素紅染色及鈣化結節(jié)計數。
　　 結果：原代培養(yǎng)細胞呈典型成纖維細胞樣形態(tài)；壞死骨培養(yǎng)液可促進BMSCs增殖，但對