1、背景與目的：
　　胰腺癌是一種死亡率極高的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,尋找有效治療方案,提高患者生存率一直是困擾醫(yī)學界的難題。蛋白酶體抑制劑—硼替佐米(PS-341,商品名:萬珂)是一種新型抗腫瘤制劑,已被美國食品藥品管理局(FDA)批準用于反復性或頑固性的多發(fā)性骨髓瘤治療。研究發(fā)現硼替佐米對大部分腫瘤也具有抗癌活性,包括小細胞肺癌、乳腺癌、前列腺癌等。硼替佐米單藥或聯合其他化療藥物在體內和體外實驗中均能有效地抑制腫瘤生長。國外文獻報道硼替

2、佐米在不同癌細胞株中敏感性差異甚大,而與治療敏感性相關的分子機制研究國內外鮮有報道。本實驗通過研究硼替佐米對兩種胰腺癌細胞株Bxpc-3、SW1990細胞增殖、細胞凋亡的影響,檢測凋亡相關分子表達變化,探索硼替佐米殺傷癌細胞可能機制及與其藥物敏感性相關的基因。
　　方法：
　　1.采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測不同時間點,不同濃度梯度硼替佐米對兩種胰腺癌細胞活力的影響,初步確定合適作用時間及藥物濃度進行后續(xù)實驗。

3、　　2.流式細胞術檢測硼替佐米在體外誘導兩種胰腺癌細胞株凋亡情況,同時觀察相同條件下硼替佐米對兩種胰腺癌細胞株凋亡的差異。
　　3.采用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測硼替佐米對兩種胰腺癌細胞mRNA水平相關分子表達變化的影響,觀察硼替佐米抗癌活性相關分子通路及與藥物敏感性相關可能機制。
　　4.通過蛋白質免疫印跡分析法(WB)檢測硼替佐米對兩種胰腺癌細胞蛋白水平相關分子表達變化影響,進一步驗證硼替佐米抗癌活性相關分子

4、通路及與藥物敏感性有關的可能分子。
　　結果：
　　1.硼替佐米濃度大于50nM/L時,兩種胰腺癌細胞生長抑制且呈濃度依耐性。同等條件下,硼替佐米對Bxpc-3細胞生長抑制率明顯大于SW1990細胞,兩者差異有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。
　　2.50、100nM/L硼替佐米作用于 Bxpc-3和 SW1990細胞48h,細胞凋亡率分別(10.52±1.05)％、(22.56±4.23)％和(6.23±0.34)％、

5、(12.71±2.23)％,顯著高于0nm/L組的(2.15±0.47)％和(2.32±0.54)％,差異均具有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。同等條件下,50、100nM/L組Bxpc-3細胞凋亡率明顯大于SW1990細胞,差異有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)
　　3.與對照組相比,10nM/L、100nM/L硼替佐米處理 Bxpc-3、SW1990細胞后, Bak mRNA表達量組間無明顯差異(P均>0.05);Bax mRNA表

6、達上調(P均<0.05),組間差異有統(tǒng)計學意義;Bcl-2 mRNA和Bcl-XL mRNA表達下調(P均<0.05),各組間差異有統(tǒng)計學意義;而Survivin mRNA在Bxpc-3細胞中表達下調(P<0.05),SW1990細胞中表達上調(P<0.05),組間差異均有統(tǒng)計學意義。
　　4.與對照組相比,10nM/L、100nM/L硼替佐米處理后 Bxpc-3、SW1990細胞中caspase-3蛋白均裂解激活[pro-cas

7、pase-3蛋白表達減弱(P均<0.05),cleaved-caspase-3蛋白表達增強(P均<0.05)],Bax蛋白表達增強(P均<0.05),Bcl-2蛋白表達減弱(P均<0.05),組間差異均有統(tǒng)計學意義;Survivin蛋白在Bxpc-3細胞表達明顯減弱(P<0.05),而在SW1990細胞中持續(xù)高表達(P<0.05)
　　結論：
　　硼替佐米抑制胰腺癌細胞Bxpc-3、SW1990增殖、誘導凋亡,其機制可能與激