1、目的：
　　1）探討離體全肝切除自體肝移植術(ELRA)治療晚期肝臟泡球蚴病(AE)的適應癥，可行性，安全性和有效性；評價三維重建影像評估系統(tǒng)與個體化虛擬手術的臨床意義；初步探討ELRA術后移植物增生的規(guī)律；評價ELRA術經(jīng)濟和社會效益；
　　2）建立Wistar大鼠極限肝切除模型，評價極限肝切除術后的肝再生和存活率；
　　3）建立Wistar大鼠慢性肝損傷模型，探討骨髓間充質干細胞（BMSCs）和慢性肝纖維化肝再生修

2、復的關系及可能機制；
　　4）探討TLR3通路與BMSCs在慢性肝纖維化中的相互作用和與肝纖維化肝再生修復的可能機制。
　　方法：
　　課題第一部分：
　　1）總結2010年8月至2013年08月按納入標準實施的10例ELRA術治療晚期肝AE患者的臨床資料，分析臨床資料，探討臨床適應癥；
　　2）通過術前CT與三維肝臟重建軟件測量數(shù)據(jù)和手術探查所見與移植物實際質量結果分析，分析個體化虛擬手術設計的準確性和可

3、行性。
　　3）通過患者術中情況、并發(fā)癥和住院總費用等臨床資料，分析手術可行性和安全性。
　　4）術后CT隨訪1,3和6月移植肝體積(GV)和受體標準肝體積(SLV)比，結合術后PET/CT檢查結果，分析半年內肝臟增生變化。
　　課題第二部分：對Wistar大鼠分別行70％、80%、90%肝體積極限切除，統(tǒng)計術后各組大鼠的存活率，并檢測外周血清中ALT及AST濃度，對比術后14天存活大鼠肝臟質量。HE染色觀察三組肝臟組

4、織形態(tài)學變化。
　　課題第三部分：取雄性大鼠股骨和脛骨骨髓，提取、分離培養(yǎng)、純化、擴增 BMSCs，使用光學顯微鏡觀察 BMSCs的形態(tài)，用免疫組織化學(IHC)檢測 BMSCs表面 CD31、CD45、CD44、CD105、CD11b、CD29的表達陽性率。用二乙基亞硝胺（DEN）配成0.01%濃度飲用水供雌性大鼠飲用16周換正常水，建立慢性肝損傷模型,第4、8、12、16周經(jīng)尾靜脈輸注1×106個BMSCs,并設置單純造模組及

5、空白對照組；20周核磁共振（MRI)檢查大鼠肝臟；21周處死大鼠，HE染色觀察肝臟組織形態(tài)變化；原位雜交技術檢測大鼠肝臟SrY表達；VG染色觀察肝臟中膠原纖維量；IHC檢測α-SMA、TLR3；Western-blotting檢測肝臟α-SMA、TLR3、TRIF、NF-kBp65、IRF3表達，F(xiàn)Q-RT-PCR檢測TLR3、IRF3 mRNA表達。
　　結果：
　　課題第一部分：
　　1）10例移植物均存活，符合納

6、入標準時手術安全性較高。
　　2）術中探查與移植物體積和術前CT與肝臟三維重建結果一致，10例患者GV/SLV在41%-78%之間，平均60.6%，其中9例患者虛擬切除移植物體積695.11±142.14cm3，實際余肝臟體積687.78±130.81cm3（P＞0.05）；
　　3）術中1例經(jīng)臍靜脈低溫灌注外，余9例經(jīng)門靜脈灌注；2例無肝期未搭橋，3例下腔靜脈搭橋，5例人造血管腔靜脈搭橋臨時性門體分流；手術11.5～20.

7、5h，平均15.2h，無肝期200-435min，中位時間285.5min，術中輸注紅細胞懸液0～15u，術后住院時間21～58d，總并發(fā)癥發(fā)生率6例（60%）；住院總費用10.16～43.48萬元，中位費用17.44萬元；
　　4)CT測術后第1月移植物體積平均增加14.75%；術后2～3月平均每月增加3.75%；術后4～6月平均每月增加3.08%；術后半年移植物/標準肝體積比平均87.5%；PET/CT測18氟-脫氧葡萄糖（1

8、8F-FDG）的平均標準攝取率（SUVave）0.9～1.9；隨訪時間2～37個月，1例術后6個月死亡，最長存活時間27個月。
　　課題第二部分：
　　1)大鼠肝切術后6h開始出現(xiàn)死亡，術后8-12h為死亡高峰，70%、80%、90%肝體積切除組2周存活率分別為86.7%、80%、7%。
　　2）80%及90%肝體積切除組術后8h、12h時血清ALT、AST濃度比70%組顯著增高（P﹤0.05），而80%與90%組之間

9、無差異（P﹥0.05）；80%組術后24h、3天時血清ALT及AST濃度比70%肝體積切除組高（P﹤0.05）；術后7天左右各組ALT及AST濃度基本恢復正常。
　　3)術后14天80%組剩余肝體積明顯大于70%肝體積切除組（P﹤0.05）。
　　4）三組肝臟組織形態(tài)無明顯異常。
　　課題第三部分：
　　1）P3代BMSCs細胞表面的CD31、CD45、CD44、CD105、CD11b、CD29的陽性率分別為（1

10、2.0%、8%、1.2%、62.2%、1.5%、16.7%）；
　　2)原位雜交技術檢測示僅有BMSCs移植組表達SrY。
　　3）核磁共振結果示BMSCs移植組肝臟上結節(jié)數(shù)量比單純造模組多（P<0.05）；
　　4）HE染色顯示單純造模組8只輕度肝纖維化形成；BMSC移植組中9只形成明顯的肝纖維化，1只形成肝癌；空白對照組無肝纖維化形成。
　　5)IHC顯示BMSCs移植組比單純造模組α-SMA陽性表達率高(P

11、<0.05)；空白對照組無表達。TLR3主要表達于肝細胞包漿中；
　　6）VG染色BMSCs移植組膠原區(qū)的百分比數(shù)比單純造模組高(P<0.05）。
　　7）western blotting結果顯示BMSCs移植組比單純造模組α-SMA蛋白水平高(P<0.05)，BMSCs移植組肝臟中TLR3、NF-kBp65、IRF3蛋白水平及 TLR3、IRF3mRNA表達比空白對照組和單純造模組都高（P均<0.05），單純造模組稍高于空

12、白對照組（P<0.05）；而TRIF蛋白表達水平在三組間無明顯差異（P>0.05）。
　　結論：
　　1）對于外科原位手術切除極為困難或無法切除的晚期肝AE可以通過ELRA術治療，適應癥為本研究納入標準；CT和三維肝臟重建軟件能夠在術前準確評估肝臟病灶與主要管道關系，評價病灶侵犯程度和預測移植物體積，提高手術安全性；在無肝期個體化處理進行人造血管腔靜脈搭橋，臨時性門體分流技術，下腔靜脈免重建技術和離體肝切除血管重建技術等綜合

13、應用安全、有效；術后移植肝再生主要發(fā)生于術后半年內，尤其是術后第1個月，術后2～6月明顯放緩，半年后基本接近患者標準肝體積；ELRA術治療晚期肝AE有巨大的經(jīng)濟和社會效益，有助于在國內外推廣應用；
　　2）大鼠肝切除量在80%以下是安全的，提示對于正常成人極限肝切體積有可能超越70%；且肝臟切除量越大，肝臟增生體積越多；
　　3）BMSCs在DEN所致的慢性肝損傷模型中具有促進肝纖維化的作用，并有致肝癌的可能；
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