1、黃瓜(Cucumis sativus L．)屬二倍體異花授粉一年生藤本植物，是我國(guó)保護(hù)地生產(chǎn)中產(chǎn)量最高的一種蔬菜作物，也是目前十種被廣泛栽培的蔬菜系列之一。傳統(tǒng)的黃瓜品種選育方法，只能從表型上選擇，而不能從基因型、分子水平上選擇。表型是基因型與環(huán)境共同作用的結(jié)果，各世代選擇培育的環(huán)境條件又不可能完全一致，因此同一基因型的表現(xiàn)型在各世代也不完全相同，所以在常規(guī)育種中需要人面積的育種區(qū)，以盡一切可能減少優(yōu)良基因型的丟失。盡管如此，傳統(tǒng)育種方

2、法仍難免顧此失彼，要選育出最佳基因型組合仍然十分困難。為此，育種學(xué)家們?cè)趥鹘y(tǒng)育種的基礎(chǔ)上不斷探索新的育種方法。近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展，提出了分子輔助育種(Marker-assisted selection，簡(jiǎn)稱(chēng)MAs)，它可以彌補(bǔ)傳統(tǒng)育種方法的不足，提高其準(zhǔn)確性并加速育種進(jìn)程。優(yōu)質(zhì)的黃瓜品種一直是黃瓜育種家追求的目標(biāo)，但由于黃瓜品質(zhì)性狀遺傳基礎(chǔ)的復(fù)雜性和研究的滯后，進(jìn)行黃瓜優(yōu)質(zhì)品種轉(zhuǎn)育較為困難，需時(shí)漫長(zhǎng)，標(biāo)記輔助選擇技術(shù)

3、的發(fā)展能極大地縮短傳統(tǒng)育種的進(jìn)程。如能獲得與優(yōu)良品質(zhì)性狀緊密連鎖的分子標(biāo)記，就能夠通過(guò)分子標(biāo)記輔助育種技術(shù)，準(zhǔn)確、快速地選擇或轉(zhuǎn)育優(yōu)質(zhì)性狀，縮短育種年限，加速育種進(jìn)程。同時(shí)，獲得與優(yōu)良品質(zhì)性狀緊密連鎖的分子標(biāo)記，可為克隆控制該性狀的基因并深入研究該性狀形成的分子機(jī)制等奠定基礎(chǔ)。本試驗(yàn)利用兩個(gè)黃瓜品質(zhì)性狀相對(duì)的高代黃瓜自交系及其所衍生的F<,1>代、F<,2>代為試材，采用AFLP技術(shù)，獲得了一個(gè)與黃瓜品質(zhì)性狀緊密連鎖的標(biāo)記并成功轉(zhuǎn)化為S

4、CAR標(biāo)記。 主要研究結(jié)果如下： 1．提取了高質(zhì)量的黃瓜基因組DNA采用能減少果膠等多糖污染的改良CTAB法提取基因組DNA，用T<,10>E<,1>溶解后，1％瓊脂糖凝膠電泳和溴化乙錠染色檢測(cè)。結(jié)果顯示，黃瓜基因組DNA帶型表現(xiàn)整齊、清晰，大小在23kb左右。 2．建立了適宜黃瓜AFLP分析的技術(shù)體系本試驗(yàn)以黃瓜為材料，通過(guò)對(duì)AFLP反應(yīng)體系中DNA用量，預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋倍數(shù)等幾個(gè)關(guān)鍵因素進(jìn)行優(yōu)化，建立了適宜黃瓜

5、的AFLP體系，可用于黃瓜的遺傳研究。25μl體系中酶切基因組DNA適宜用量為100ng,預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物適宜稀釋倍數(shù)為30倍。 3．利用64對(duì)引物從親本中發(fā)現(xiàn)了79條AFLP差異帶選用64對(duì)引物組合，采用AFLP技術(shù)結(jié)合銀染從親本中發(fā)現(xiàn)79條差異帶。 4．克隆兩條AFLP差異帶的序列從79條差異帶中克隆了其中兩條差異明顯，大小適當(dāng)?shù)牟町悗?，并進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序后提交到NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行序列比對(duì)。比對(duì)結(jié)果顯示其中長(zhǎng)度為363bp的

6、片段為黃瓜中新發(fā)現(xiàn)的片段，命名為V7T3A<,363>。而長(zhǎng)度為181bp的片段與已發(fā)現(xiàn)的黃瓜葉綠體ATP合成酶β亞基完全一致，命名為V7T5A<,181>。 5．將V7T3A<,363>和V7T5A<,181>2個(gè)AFLP標(biāo)記成功轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記利用測(cè)序所得的序列，設(shè)計(jì)PCR引物進(jìn)行F<,2>代驗(yàn)證。驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)兩對(duì)引物均在F<,2>代出現(xiàn)分離，經(jīng)過(guò)軟件分析發(fā)現(xiàn)，V7T3A<,363>與果皮純顏色/雜色性狀的遺傳距離為36.36