1、CD20是B淋巴細(xì)胞表面特異性抗原之一，在淋巴細(xì)胞分化早期表達(dá)并且能激活淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞增殖分化。CD20抗原由于其在淋巴細(xì)胞表面廣泛存在和不會(huì)從淋巴細(xì)胞表面游離進(jìn)入血液循環(huán)的特性被選為治療各種淋巴癌癥的靶蛋白。抗CD20的嵌合抗體由鼠抗人CD20可變區(qū)肽段和人抗體IgG恒定區(qū)肽段組成，臨床實(shí)驗(yàn)證明嵌合抗體的治療效果明顯且副反應(yīng)小，并且已經(jīng)被美國FDA批準(zhǔn)投入市場。目前嵌合抗體通過CHO癌細(xì)胞生產(chǎn)，但細(xì)胞的低表達(dá)量和細(xì)胞培養(yǎng)的高成

2、本限制抗體的大量生產(chǎn)。本研究的目標(biāo)就是制備高效表達(dá)CD20嵌合抗體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型。 我們構(gòu)建了乳腺特異性抗體輕鏈表達(dá)載體HuK1F-pBC1和重鏈表達(dá)載體HuG1F-pBC1，表達(dá)載體線性化后等比例混合，通過顯微共注射受精卵雄原核的方法制備轉(zhuǎn)基因小鼠。注射后共出生52只小鼠，用PCR和Southern雜交的方法檢測出5只(3♀，2♂)雙鏈整合的轉(zhuǎn)基因陽性小鼠，10只單鏈整合的轉(zhuǎn)基因陽性小鼠。轉(zhuǎn)基因整合率28.8％，雙鏈整合率為

3、9.6％。將雙鏈整合的陽性小鼠和野生型小鼠配種擴(kuò)群，采集乳汁樣品。Western雜交檢測轉(zhuǎn)基因母鼠乳汁中抗CD20嵌合抗體的表達(dá)。在F0代26，36號鼠，F(xiàn)1代21，22，23號鼠中檢測到重組抗體的表達(dá)。ELISA進(jìn)一步定量分析抗體在小鼠乳汁中的含量，其中F0-36，F(xiàn)1-21號小鼠表達(dá)量分別為0.29mg/ml，0.31m∥ml，F(xiàn)0-26表達(dá)量達(dá)7.6mg/ml，F(xiàn)1-22表達(dá)量達(dá)14.3mg/ml，F(xiàn)1-23表達(dá)量高達(dá)17.7mg