1、第一部分益生菌對人離體結(jié)腸平滑肌收縮的影響
　　目的：研究不同種屬益生菌(長雙岐桿菌,嗜酸乳桿菌,嗜熱鏈球菌和糞球菌)對人離體結(jié)腸環(huán)形肌肌條收縮的影響。
　　方法：收集本院符合納入標準的結(jié)腸癌患者手術(shù)切除標本,取離病變部位5cm以上的正常結(jié)腸組織2cm*2cm,制作0.3*1.0cm平滑肌條(共25例患者,90條平滑肌條),恒溫水浴槽中孵育,不同益生菌的完整活菌、益生菌粗提物和無菌培養(yǎng)上清加入水浴槽內(nèi)干預(yù)離體結(jié)腸平滑肌條,采

2、用多通道生理記錄儀記錄平滑肌收縮;分析離體結(jié)腸平滑肌收縮曲線的AUC(曲線下面積,g×s)以評價結(jié)腸收縮活動。
　　結(jié)果：(1)107-109CFU/mL四種益生菌活菌(長雙歧桿菌,嗜酸乳酸桿菌,嗜熱鏈球菌,糞腸球菌),除109CFU/mL糞腸球菌外,均對人結(jié)腸離體平滑肌條無顯著影響(P>0.05);109CFU/mL糞球菌可誘發(fā)肌條舒張,P<0.05。1010CFU/mL四種菌均明顯抑制離體平滑肌條收縮,與基礎(chǔ)水平相比,AUC改

3、變率分別為:長雙歧桿菌(31.03±4.56),嗜酸乳桿菌(30.56±15.66),嗜熱鏈球菌(24.64±2.61),糞腸球菌(54.15±5.83);與107CFU/mL活菌相比,各組1010CFU/mL活菌誘發(fā)的環(huán)形肌舒張作用均有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。(2)益生菌粗提物呈濃度依賴抑制人結(jié)腸平滑肌收縮,予300μL粗提物后各組肌條收縮基本被完全抑制,與10μL相比,AUC抑制率分別為:長雙歧桿菌(68.30±5.70vs.2

4、.80±1.20,P<0.01),嗜酸乳桿菌(80.44±5.20vs.1.90±3.10,P<0.01),嗜熱鏈球菌(82.80±1.10vs.1.80±1.90,P<0.01)及糞球菌(56.80±7.30vs.-4.60±2.70,P<0.01),各菌種引起的收縮減弱作用在菌種間無明顯差異(P>0.05)。(3)無菌培養(yǎng)上清呈濃度依賴抑制人結(jié)腸平滑肌收縮,其中上清對肌條收縮的影響是:與低濃度(10μL上清于25mL水浴槽中)相比,

5、高濃度(300μL上清于25mL水浴槽中)長雙歧桿菌(42.4±7.36vs.11.27±3.54),嗜酸乳桿菌(41.52±8.08vs.5.51±1.95),嗜熱鏈球菌(47.48±6.75vs.4.17±1.68)及糞球菌(37.33±6.69vs.5.43±2.02)可顯著抑制結(jié)腸肌條收縮(P<0.05);菌種間無顯著差異;(4)L-NNA干預(yù)后,嗜熱鏈球菌及糞球菌無菌上清對結(jié)腸收縮的抑制被顯著逆轉(zhuǎn),其AUC抑制率分別為0.24

6、±6.55,-2.92±9.1,與干預(yù)前比,均有P<0.05,而長雙岐桿菌和嗜酸乳桿菌組無明顯改變。
　　結(jié)論：(1)長雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌,嗜熱鏈球菌和糞球菌的活菌對肌條收縮有抑制作用,存在閾值濃度;(2)長雙歧桿菌,嗜酸乳桿菌,嗜熱鏈球菌及糞球菌的粗提物及無菌培養(yǎng)上清呈濃度依賴抑制人結(jié)腸平滑肌收縮;不同菌種對腸道收縮的抑制作用稍有差異,但無統(tǒng)計學(xué)意義;(3)嗜熱鏈球菌和糞球菌的代謝產(chǎn)物可能部分通過調(diào)節(jié)NO的產(chǎn)生來影響腸道運動。

7、
　　第二部分益生菌對PI-IBS模型小鼠腸道運動的影響
　　目的：研究旋毛蟲感染的PI-IBS模型小鼠腸道運動改變及不同種屬益生菌(長雙岐桿菌,嗜酸乳酸桿菌,糞球菌和三者混合菌)對模型鼠腸道收縮的影響。
　　方法：用旋毛蟲感染建立PI-IBS小鼠模型,再分別給予乳酸桿菌、雙岐桿菌、糞球菌以及三種混合菌灌胃,一周后采用電生理法記錄各組小鼠離體結(jié)腸自發(fā)收縮及Ach誘導(dǎo)的收縮功能。分析結(jié)腸離體平滑肌收縮曲線的AUC(曲線下

8、面積,g×s)以評價結(jié)腸收縮活動。
　　結(jié)果：(1)正常對照組,PI-IBS模型組及各益生菌干預(yù)組的離體結(jié)腸自發(fā)性收縮無統(tǒng)計學(xué)差異,P>0.05;(2)在10-5mol/LAch誘導(dǎo)的收縮中,與正常對照組相比,旋毛蟲感染的PI-IBS小鼠模型存在腸道高收縮性趨勢(AUC改變率為62.6±14.25vs.37.92±8.36但無統(tǒng)計學(xué)差異,P>0.05;長雙歧桿菌和混合菌干預(yù)組可顯著改善模型組的高收縮性,與模型組相比,AUC改變率分

9、別為31.66±7.21vs.62.6±14.25,P=0.24和33.31±5.68vs.62.6±14.25,P=0.26;而與正常對照組離體肌條的收縮性(37.92±8.36)接近;兩干預(yù)組間收縮無顯著差異;嗜酸乳桿菌干預(yù)組的收縮與模型組相比有減弱趨勢,AUC改變率為41.98±7.57vs.62.6±14.25,但無統(tǒng)計學(xué)差異,P>0.05;與正常對照組相比亦無統(tǒng)計學(xué)意義;糞球菌干預(yù)組較PI-IBS模型組的腸道收縮性無顯著改變,

10、AUC改變率為60.49±16.54vs.62.6±14.25,其收縮性仍有強于正常組的趨勢(P=0.053)。(3)各菌種在調(diào)整腸道運動方面有所不同,在10-5mol/LAch誘導(dǎo)的肌條收縮中,長雙歧桿菌與糞球菌組之間存在差異,P=0.047,其余各組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論：旋毛蟲感染后的小鼠腸道在急性感染期后仍然存在高收縮反應(yīng)趨勢,予長雙歧桿菌及混合菌(長雙歧桿菌,嗜酸乳桿菌和糞球菌)灌胃后可使其恢復(fù)正常,嗜酸乳桿菌有