1、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是心血管疾病的病理基礎(chǔ)，其發(fā)病機(jī)制備受關(guān)注但至今尚未闡明。近年來(lái)研究表明，AS是一個(gè)慢性炎癥免疫過(guò)程，炎癥參與動(dòng)脈粥樣硬化的形成和斑塊破裂過(guò)程，炎癥和免疫反應(yīng)不僅在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中具有重要作用，而且在易損斑塊的發(fā)生、發(fā)展與易損斑塊破裂中也起著關(guān)鍵的作用。各種心血管危險(xiǎn)因素通過(guò)炎癥和免疫反應(yīng)損傷血管，許多炎癥細(xì)胞如單核細(xì)胞參與斑塊的形成，其中炎性受體發(fā)揮了重要作用。TOLL

2、樣受體(Toll—like receptors，TLRs)是近年來(lái)克隆出來(lái)的跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)受體家族，是連接先天免疫和特異性免疫的紐帶。最近對(duì)Toll樣受體4(Toll—like receptor4，TLR4)在AS中作用的研究成為新的研究熱點(diǎn)。 TLR4表達(dá)于所有的細(xì)胞系，在外周血淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞均有表達(dá)，以單核細(xì)胞表達(dá)為主，TLR4可以識(shí)別多種內(nèi)源性和外源性配體，如脂多糖(lipopolysa—ccharide，

3、LPS)、熱休克蛋白(heat shock proteins，HSP)等。TLR4可通過(guò)LPS信號(hào)通道，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，產(chǎn)生腫瘤壞死因子—α(Tumor necrosis factor，TNF—α)、白介素—6(interleukin—6，IL—6)等多種促炎癥因子，可引起局部或全身性的炎癥損傷[3]，是導(dǎo)致炎癥性損害的主要環(huán)節(jié)。由于TLR4在識(shí)別LPS及介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的重要作用，其作為炎癥跨膜受體在心血管疾病中的作用也越來(lái)越多

4、的引起關(guān)注。實(shí)驗(yàn)研究表明，TLR4參與了AS的形成和發(fā)展，但TLR4在炎癥、免疫反應(yīng)中的分子生物學(xué)機(jī)制至今還未闡明。 C反應(yīng)蛋白(C reactive protein，CRP)通常作為獨(dú)特的炎性標(biāo)記物來(lái)檢測(cè)炎癥反應(yīng)性疾病，其被認(rèn)為是炎癥標(biāo)志物中預(yù)測(cè)冠脈事件的最強(qiáng)指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)證明：CRP不僅是理想的炎癥標(biāo)志物和心血管疾病發(fā)生發(fā)展的強(qiáng)有力預(yù)測(cè)因子，還可以作為動(dòng)脈粥樣硬化中炎性活化因子，導(dǎo)致內(nèi)皮活化和單核巨噬細(xì)胞聚集，在炎癥及動(dòng)脈粥樣

5、硬化發(fā)生發(fā)展過(guò)程中也起到重要的作用。但是，CRP在易損斑塊和易損斑塊破裂的炎癥機(jī)制中所扮演的角色尚未明了，是否屬與TLR4相關(guān)，是否通過(guò)TLR4模式受體介導(dǎo)而產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，尚未見(jiàn)明確報(bào)道。 研究目的： 1.觀察急性冠脈綜合征患者(Acute coronary syndrome，ACS)、穩(wěn)定型心絞痛(Stable angina pectoris，SAP)患者和對(duì)照組血漿內(nèi)毒素水平，了解ACS患者血漿內(nèi)毒素水平與其他組的異

6、同； 2.檢測(cè)冠心病患者外周血白細(xì)胞分化抗原14陽(yáng)性(Cluster of differentiation-14，CD14+)單核細(xì)胞TLR4蛋白、mRNA和髓樣分化蛋白2(myeloid differentiation protein—2，MD—2) mRNA的表達(dá)變化； 3.了解ACS患者CRP與外周血CD14+單核細(xì)胞TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的相關(guān)性。從而進(jìn)一步探討CRP在ACS患者中的致炎作用，以及作用的細(xì)胞分子機(jī)

7、制。 4.觀察ACS患者CRP與血清炎性因子腫瘤壞死因子—α(tumor necrosis factor，TNF—α)濃度的相關(guān)性。 5.初步探討TLR4介導(dǎo)的信號(hào)通道在冠心病發(fā)病中的作用，了解其致炎作用的細(xì)胞分子機(jī)制，為臨床治療急性冠脈綜合征提供新的思路。 研究方法： 選擇45例經(jīng)臨床診斷為冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(coronary artery disease，CAD)的患者，其診斷根據(jù)典型的臨床表現(xiàn)

8、、心肌酶學(xué)、心電圖等指標(biāo)，符合世界衛(wèi)生組織(World Health Organization，WHO)關(guān)于冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。急性冠脈綜合征組25例，其中急性心肌梗死16例，男9例，女7例；不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina pectoris，UAP)9例，男5例，女4例，ACS組的平均年齡63.5±11.1歲；穩(wěn)定型心絞痛(stable angina pectoris，SAP)組20例，男11例，女9例，平均年齡62.7±

9、10.6歲；對(duì)照組共入選20例體檢者，既往無(wú)冠心病史，血常規(guī)、血脂、肝腎功能指標(biāo)均正常，無(wú)其他自身免疫性疾病及感染性疾病表現(xiàn)，其中男13例，女7例，平均年齡61.2±11.6歲。 以上入選者于入院時(shí)采集外周靜脈血14ml，提取單核細(xì)胞，進(jìn)行單核細(xì)胞培養(yǎng)并收集血漿、血清備用。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)單核細(xì)胞TLR4的表達(dá)；運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription polymerase chain reaction

10、，RT—PCR)法和實(shí)時(shí)定量PCR(Real—time quantitative polymerase chain reaction)測(cè)定入選者的外周血單核細(xì)胞TLR4mRNA、MD—2 mRNA表達(dá)；血漿LPS含量用鱟試劑法檢測(cè)；凝集法檢測(cè)血清CRP水平；血清TNF—α的濃度測(cè)定采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme—linked immunsorbent assay，ELISA)；全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定所有入選者血脂水平。

11、 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：三組間比較用One—Way ANOVA單因素方差分析，兩兩間比較用LSD—t(least significant difference，LSD—t)檢驗(yàn)。計(jì)量資料采用直線相關(guān)分析和偏相關(guān)分析，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。應(yīng)用SPSS For Windows13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)論： 1.ACS患者外周血CD14+單核細(xì)胞TLR4蛋白和TLR4 mRNA及MD—2mRNA的表達(dá)顯著高于S

12、AP組及對(duì)照組。 2.ACS組與SAP組、對(duì)照組血漿內(nèi)毒素水平無(wú)顯著性差異；ACS組血清CRP、TNF—α濃度顯著高于SAP組及對(duì)照組。 3.直線相關(guān)和偏相關(guān)分析顯示：ACS患者血漿LPS水平與外周血CD14+單核細(xì)胞TLR4 mRNA無(wú)顯著相關(guān)性；血清CRP水平與外周血CD14+單核細(xì)胞TLR4蛋白表達(dá)、血清TNF—α水平呈顯著性正相關(guān)。 4.ACS患者外周血CD14+單核細(xì)胞TLR4 mRNA和MD—2 mR