1、雖然通過傳統(tǒng)的雜交育種和選育的方法培育出了在北方地區(qū)生長(zhǎng)速度快、抗寒力強(qiáng)的荷包紅鯉、高寒鯉抗寒品系等優(yōu)良品種，但鯪魚(Cirrhinus molitorella)、羅非魚等還不能依靠傳統(tǒng)的育種方法獲得抗寒品系。這就要求從基因表達(dá)水平研究魚類的耐低溫機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)主要是研究東北地區(qū)的具有耐低溫性狀的黑龍江鯉(Cyprinus carpio)的MIPS基因在斑馬魚和羅非魚中的表達(dá)情況。
　　構(gòu)建的外源表達(dá)載體在斑馬魚中的熒光觀察結(jié)果顯示

2、，兩個(gè)重組表達(dá)載體均不影響EGFP的表達(dá)，只是表達(dá)強(qiáng)度存在一定差異，未插入外源目的基因的重組表達(dá)載體中EGFP基因的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于插入外源目的基因的重組表達(dá)載體 EGFP基因的表達(dá)。重組表達(dá)載體的成功構(gòu)建顯示金魚 Tgf2轉(zhuǎn)座子和普通表達(dá)載體可以介導(dǎo)外源基因在斑馬魚中的表達(dá)。
　　對(duì)轉(zhuǎn)基因斑馬魚F1、F2代和轉(zhuǎn)基因羅非魚F1代進(jìn)行PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示靶基因MIPS的編碼區(qū)能夠完整的整合到斑馬魚和羅非魚基因組中，檢測(cè)注射 pTgf

3、2-EF1α-MCS-EGFP的轉(zhuǎn)基因斑馬魚F1代整合效率達(dá)31.4％；檢測(cè)注射普通表達(dá)載體的轉(zhuǎn)基因斑馬魚F1代整合效率達(dá)30.4%；檢測(cè)注射表達(dá)載體 pTgf2-EF1α-MIPS-EGFP的轉(zhuǎn)基因斑馬魚F2代整合效率達(dá)18.1%；檢測(cè)注射表達(dá)載體 pTgf2-EF1α-MIPS-EGFP的轉(zhuǎn)基因羅非魚整合效率達(dá)6.01%，證實(shí)外源目的抗寒基因MIPS在轉(zhuǎn)基因斑馬魚和羅非魚中都有表達(dá)。
　　以PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)出外源目的基因轉(zhuǎn)基因斑

4、馬魚F2代個(gè)體和羅非魚 F1代個(gè)體為實(shí)驗(yàn)魚進(jìn)行的低溫耐受實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因組的半致死時(shí)間為37.86 h大于未轉(zhuǎn)基因的對(duì)照組37.76 h。根據(jù)卡方計(jì)算公式進(jìn)行兩組半致死時(shí)間的比較，得 X2=0.000小于0.05，說明轉(zhuǎn)基因組和對(duì)照組的半致死時(shí)間的差異不顯著，即轉(zhuǎn)基因個(gè)體和對(duì)照組在耐低溫能力上沒有明顯的區(qū)別。斑馬魚實(shí)時(shí)熒光定量 PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，抗寒基因MIPS在常溫轉(zhuǎn)基因斑馬魚中表達(dá)量最高，在低溫耐受實(shí)驗(yàn)中最后死掉的轉(zhuǎn)基因斑馬魚