1、土傳病害是指生活在土壤中的病原微生物，在條件適宜時(shí)，從作物根部或莖部侵害作物而引起的病害。由于連茬耕作、長(zhǎng)期施用化肥等問(wèn)題，導(dǎo)致土壤中有害微生物的種類和數(shù)量增加，有益微生物的種類和數(shù)量急劇減少，微生物區(qū)系嚴(yán)重失調(diào)，土傳病害進(jìn)一步加重?？菸∈且环N真菌性土傳病害，尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)是引起該病害的主要病原菌，該菌株從根部侵染植物，破壞植物維管束，導(dǎo)致植物枯死，對(duì)棉花、番茄、黃瓜、冬瓜、甜瓜、絲瓜等經(jīng)濟(jì)作物危害

2、嚴(yán)重。
　　本研究以枯萎病為研究對(duì)象，利用對(duì)峙實(shí)驗(yàn)、發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、盆栽實(shí)驗(yàn)、田間試驗(yàn)、生物統(tǒng)計(jì)相結(jié)合的方法，系統(tǒng)研究黑根霉（Rhizopus nigricans）和擬康氏木霉（Trichoderma pseudokoningii）對(duì)植物枯萎病的協(xié)同防治作用。
　　本研究主要取得以下研究結(jié)果及結(jié)論:
　　1.生防菌的篩選:利用對(duì)峙實(shí)驗(yàn)測(cè)定5種絲狀真菌包括黑根霉(R.nigricans)、擬康氏木霉（T.pseudokonin

3、gii）、擬康氏木霉Ⅰ(T.pseudokoningiiⅠ)、對(duì)植物枯萎病病原菌尖孢鐮刀菌的4種?；停S瓜?；?、山藥?；?、茄科?；汀⒑坦葘；停┖椭参锘颐共〔≡移咸焰撸˙otrytis cinerea）的抑制效果，結(jié)果表明，5種生防菌對(duì)5種病原菌均表現(xiàn)出不同程度的抑制作用。其中，黑根霉和擬康氏木霉對(duì)5種病原菌都有較為明顯的抑制作用，抑制率均高于55.0％。所以，以下實(shí)驗(yàn)選擇黑根霉和擬康氏木霉為研究對(duì)象，進(jìn)一步分析其對(duì)枯萎病防

4、治效果。
　　2.混合發(fā)酵:以擬康氏木霉作為目標(biāo)菌，黑根霉作為挑戰(zhàn)菌，將黑根霉和擬康氏木霉按照不同比例接種量(1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5)接入到PDB培養(yǎng)基，進(jìn)行混合發(fā)酵10天。利用菌絲生長(zhǎng)速率實(shí)驗(yàn)測(cè)定生防菌發(fā)酵液對(duì)尖孢鐮刀菌黃瓜轉(zhuǎn)化型和灰葡萄孢的抑制作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黑根霉發(fā)酵液和擬康氏木霉發(fā)酵液對(duì)兩種病原菌的抑制率分別為17.6％和47.1％、77.2％％和55.9％;1∶1和1∶2接種量的混合發(fā)酵，提高了發(fā)酵液對(duì)病

5、原菌的抑制率，分別達(dá)到85.3％、67.6％、85.3％、70.6％;1∶3、1∶4、1∶5反而降低了發(fā)酵液的抑菌效果。以下所用擬康氏木霉和黑根霉混合發(fā)酵液均為按照1∶1接種量發(fā)酵。
　　3.生防菌發(fā)酵液對(duì)黃瓜枯萎病的防治效果:溫室條件下，通過(guò)傷根處理的方法，在黃瓜根部接種107 cfu/ml的尖孢鐮刀菌孢子懸浮液，黃瓜發(fā)病率達(dá)100％。與只接種病原菌的對(duì)照組相比，擬康氏木霉發(fā)酵液處理組、黑根霉發(fā)酵液處理組的黃瓜發(fā)病率分別為68.

6、7％、75.0％，相對(duì)防效分別為31.2％、25.0％。黑根霉和擬康氏木霉混合發(fā)酵液處理組的黃瓜發(fā)病率為56.3％，相對(duì)防效為43.7％，表明黑根霉和擬康氏木霉的混合發(fā)酵液對(duì)黃瓜枯萎病的防治效果比單一生防菌的防治效果強(qiáng)。
　　4.病原菌的定量追蹤:利用熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白標(biāo)記的病原菌在黃瓜植株各組織內(nèi)的含量，結(jié)果表明，在黃瓜植株根莖部出現(xiàn)褐變現(xiàn)象時(shí)，與病原菌處理的對(duì)照組相比，黃瓜根部、莖部及根際土壤中的病原菌含量最高，黑根霉

7、和擬康氏木霉混合發(fā)酵液處理組的黃瓜根部、莖部及根際土壤中的病原菌含量最低。
　　5.實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)黃瓜各組織及土壤中尖孢鐮刀菌的含量:尖孢鐮刀菌通過(guò)在根際土壤中定殖，侵染植物根系，進(jìn)而侵染到植物根莖部的維管束組織，此時(shí)，植物的根莖部會(huì)出現(xiàn)褐變現(xiàn)象，植株開(kāi)始萎焉。對(duì)黃瓜莖稈中的病原菌進(jìn)行定量，結(jié)果表明，黑根霉和擬康氏木霉混合發(fā)酵液處理組、擬康氏木霉發(fā)酵液處理組、黑根霉發(fā)酵液處理組的抑制率分別為22.7％、18.5％、11.9

8、％;對(duì)黃瓜根系中的病原菌進(jìn)行定量，三種處理組的抑制率分別為24.3％、17.1％、7.2％;對(duì)黃瓜根際土壤中的病原菌進(jìn)行定量，三種處理組的抑制率分別為20.5％、10.6％、6.9％。該結(jié)果進(jìn)一步表明，黑根霉和擬康氏木霉協(xié)同作用抑制了病原菌的侵染。
　　6.植物酶活實(shí)驗(yàn)測(cè)定黃瓜防御酶的變化趨勢(shì):通過(guò)對(duì)五種處理的不同時(shí)間段進(jìn)行取樣，檢測(cè)過(guò)氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)的酶活變化趨勢(shì)，結(jié)果表明，

9、與單一生防菌發(fā)酵液相比，混合生防菌發(fā)酵液處理組的黃瓜防御酶反應(yīng)速率最快，維持時(shí)間最長(zhǎng)。
　　7.田間實(shí)驗(yàn):通過(guò)對(duì)試驗(yàn)田進(jìn)行兩年的處理，從第一次用黑根霉和擬康氏木霉混合發(fā)酵液處理對(duì)棉花枯萎病的沒(méi)有防治效果，到經(jīng)過(guò)五次處理之后，對(duì)棉花枯萎病的相對(duì)防效達(dá)到76.5％，并且棉花的株高，葉片濃綠程度及棉花花鈴數(shù)都有顯著的提高。
　　綜上所述，本文通過(guò)尖孢鐮刀菌篩選出具有生防作用的黑根霉和擬康氏木霉，用這兩種真菌菌株制成的生物菌劑，具有