1、A t h e s i s ( d i s s e r t a t i o n ) s u b m i t t e d t oZ h e n g z h o u U n i v e r s i t yf o r t h ed e g r e e o f M a s t e r ( d o c t o r )M e c h a n i s m o f m a c r o a u t o p h a g y r e g u l a t e

2、d b yr h G - - C S F‘ l - ● ● ● ‘·’L f D ·· 一 一 一 ·i n v o l v i n g l nr e P a i r i n g w i t hn e u r o n a t - t e ri s c h e m i a - h y p o x i aB y L if a n gS u p e r v i s o r ：P r o f ．J u n

3、 f a n g T e n gD e p a r t m e n t o f N e u r o l o g yT h e F i r s t A f f i l i a t e dH o s p i t a l o f Z h e n g z h o u U n i v e r s i t yA p r i l 2 0 1 3中文摘要r h G —C S F 調(diào)控巨自噬參與缺血缺氧后神經(jīng)元損傷修復(fù)的機(jī)制研究摘要背景和目的：腦血管疾病

4、目前已成為我國致死率、致殘率較高的疾病之一，而缺血性疾病占腦血管疾病中的7 0 —8 0 ％，因此積極有效的進(jìn)行臨床干預(yù)治療具有重大的社會(huì)意義。r h G - C S F ( 重組人粒細(xì)胞集落刺激因子) 是一種造血生長因子，具有促進(jìn)中性粒細(xì)胞系造血祖細(xì)胞增殖分化的能力。近來國外有越來越多的實(shí)驗(yàn)研究證據(jù)顯示，其在神經(jīng)組織的修復(fù)和功能恢復(fù)中發(fā)揮著重要作用，如促神經(jīng)細(xì)胞再生、抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡、促血管再生、抗炎及免疫調(diào)節(jié)等。然而r h G ．C

5、S F 對(duì)腦缺血后神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)的具體機(jī)制卻尚未清楚，其對(duì)巨自噬的影響也鮮見報(bào)道。本研究觀察了腦缺血后體內(nèi)及體外神經(jīng)元L C 3 I I ／L C 3I 比值的變化，探討了r h G - C S F 對(duì)巨自噬的調(diào)控及其可能的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法：采取氧糖剝奪( O G D ) 法制作細(xì)胞缺氧模型；W e s t e r nb l o t 法檢測不同濃度r h G —C S F 干預(yù)下細(xì)胞L C 3 I I ／L C

6、3I 比值變化，單丹磺酰戊二胺( M D C ) 法熒光分析巨自噬空泡變化，噻唑藍(lán)( M T T ) 比色法檢測細(xì)胞活性；應(yīng)用改良線栓法建立大鼠局灶性腦缺血模型，r h G - C S F 干預(yù)前后進(jìn)行改良的神經(jīng)功能缺損評(píng)分( I I l N S S ) 評(píng)定，W e s t e r n b l o t 法檢測大鼠皮層神經(jīng)元L C 3 I I ／L C 3I 比值變化，免疫組化法檢測L C 3蛋白表達(dá)變化。結(jié)果：r h G ．C S F

7、 處理后的細(xì)胞缺氧模型，低、高劑量組L C 3 I I ／L C 3I 比值較未加藥組上調(diào)，高劑量組L C 3 I I ／L C 3I 比值較低劑量組上調(diào)，顯示了隨r h G ．C S F 給藥劑量濃度的增加，L C 3 I I ／L C 3I 比值也逐漸增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( p < O ．0 5 ) ；M D C 染色顯示隨r h G ．C S F 給藥濃度增加，巨自噬空泡數(shù)量逐漸上調(diào)，呈劑量依賴性，顯示隨給藥濃度增加，

8、自噬活性也相應(yīng)增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( p < O ．0 5 ) ；r h G ．C S F 組大鼠神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分較模型組有降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( p < 0 ．0 5 ) ；治療后較治療前比較，大鼠的神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分有降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( p < O ．0 5 ) ，顯示r h G ．C S F 治療下有修復(fù)神經(jīng)系統(tǒng)的作用；大鼠模型組的L C 3 I I ／L C 3 I 比值較假手術(shù)組上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義Q