1、目的:應(yīng)用深度增強成像技術(shù)研究不同階段的糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabeticretinopathy, DR)和糖尿病黃斑水腫(diabetic macular edema, DME)黃斑區(qū)脈絡(luò)膜厚度變化，建立視網(wǎng)膜müller細胞原代培養(yǎng)體系，探討不同階段DR與PPARγ基因單核苷酸多態(tài)性的相關(guān)性及其影響因素。
　　方法:選擇正常志愿者共120例，年齡25～85歲。根據(jù)研究對象不同年齡分組。深度增強成像相干光斷層掃描測量脈絡(luò)膜厚度。

2、分析黃斑中心凹脈絡(luò)膜厚度(subfoveal choroidal thickness，SFCT)與年齡的相關(guān)性。收集2型糖尿病患者92例（92眼），共分為3組:A組(DR-/DME-):無DR無DME組36例（36眼）;B組(NPDR+/DME-):無DME的非增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變(Non-proliferativediabetic retinopathy, NPDR)組47例（47眼）;C組(PDR+/DME-):無DME的增生性糖

3、尿病視網(wǎng)膜病變(Proliferative diabetic retinopathy, PDR)組9例（9眼），分別比較組間脈絡(luò)膜厚度的差異、各組與正常人群脈絡(luò)膜厚度的差異。選擇DME33例33眼，采集指標:空腹血糖、糖化血紅蛋白(Glycosylated hemoglobin，HbAlc)、總膽固醇(Total cholesterol，TC)、甘油三酯(Triglycerides，TG)、高密度脂蛋白(High-density lip

4、oprotein，HDL)、低密度脂蛋白(Low-density lipoprotein，LDL)等。比較DME與正常人群及不同階段DR的脈絡(luò)膜厚度。分析糖尿病病程、空腹血糖、HbAlc、TG、TC、LDL、HDL、UAER等因素與DME脈絡(luò)膜厚度變化的相關(guān)性。另選擇不同階段DR120例120眼，直接測序法檢測PPARγ pro12Ala位點基因型，比較不同階段DR等位基因和基因型頻率分布差異，分析等位基因和基因型與DR發(fā)生的相關(guān)性;分

5、析PPARγ基因pro12Ala位點多態(tài)性與不同階段DR的相關(guān)性。進一步探討不同等位基因與TG、LDL、HDL、HbAlc、UAER等臨床生化指標的相關(guān)性。同時應(yīng)用改良方法進行體外原代培養(yǎng)并純化鑒定SD大鼠視網(wǎng)膜müller細胞，為下一步研究提供實驗基礎(chǔ)。
　　結(jié)果:正常人群平均SFCT為（271.32±35.63）μm男性SFCT平均值為（286.32±35.98）μm，60名女性為（254.33±39.61）μm，男性平均SF

6、CT高于女性，且兩者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。不同年齡組之間SFCT差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。隨著年齡的增加，SFCT逐漸減小，與年齡呈負相關(guān)(r=-0.781，P＜0.001)。A組:(DR-/DME-)的SFCT為145～306μm，平均為（271.19±34.68）μm，與正常對照人群的平均SFCT進行比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。B組:(NPDR+/DME-)的SFCT為176～336μm，平均為

7、(259.64±37.79)μm，與正常對照的平均SFCT比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。C組:(PDR+/DME-)的SFCT為171～289μm，平均（232.98±34.13）μm，與正常對照的平均SFCT比較，脈絡(luò)膜明顯變薄，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。D組:(NPDR+/DME+)的SFCT為156～278μm，平均為（229.64±33.66）μm，與正常對照45～65歲（含）年齡組的平均SFCT（270.7

8、8±35.97）μm比較，脈絡(luò)膜明顯變薄，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。D組與B組及正常人群比較，D組脈絡(luò)膜明顯變薄，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。HbAlc、LDL、UAER水平是DME發(fā)生的危險因素，其Exp(B)分別是5.512(P＜0.001);2.821(P=0.017);1.582(P=0.009)。合并DME的NPDR脈絡(luò)膜厚度與LDL和UAER具有相關(guān)性(r=-0.601、-0.673，P＜0.01)，

9、而與糖尿病病程、空腹血糖、HbAlc、TG、TC、HDL、肌酐、收縮壓及舒張壓均無相關(guān)性(r=-0.253、0.219、0.095、0.310、0.185、0.224、0.237、0.421、0.281，P＞0.05)。通過胰蛋白酶多次反復(fù)短時間消化，以谷氨酰胺合成酶為特異性抗體進行細胞鑒定，體外培養(yǎng)的müller細胞形態(tài)一致，谷氨酰胺合成酶反應(yīng)陽性。DR患者PPARγ基因G等位基因的分布頻率為5.8％，PDR和NPDR患者基因型均以C

10、/C型為主導(dǎo)，所占比例分別為87％和89.2％，二者之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。不同基因型全身主要生化指標比較顯示:與CC基因型的DR患者相比，G/G或G/C基因型患者UAER水平明顯降低，具有統(tǒng)計學(xué)差異，而TG、LDL、HDL、HbAlc水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:正常中國人平均SFCT為271.32±35.63μm，各年齡段男性平均SFCT高于女性。隨著年齡的增加，SFCT逐漸減小，與年齡呈負相關(guān)。鼻側(cè)脈絡(luò)膜均最薄。隨著DR加

11、重，脈絡(luò)膜厚度呈降低趨勢。無DR的PDR患者脈絡(luò)膜較正常人及無DR糖尿病患者均明顯變薄，與無DME的NPDR相比，合并DME的NPDR脈絡(luò)膜顯著變薄。LDL和UAER水平與DME脈絡(luò)膜厚度呈負相關(guān)。胰蛋白酶反復(fù)消化培養(yǎng)是一種可靠的獲得較為純化、表達穩(wěn)定的müller細胞體外原代培養(yǎng)的方法。PPARγ基因pro12Ala位點的基因型和等位基因的分布頻率與DR的發(fā)生，以及不同階段的DR無明確相關(guān)性;但PPARγ基因G等位基因可能減低DR患者