1、研究背景:
　　隨著近年來我國經(jīng)濟社會的發(fā)展，老齡化的提高、飲食結構和生活方式的改變，冠心病的發(fā)病率不斷增高，雖然目前治療手段取得了長足的進步，然而這些治療均不能挽救已經(jīng)梗死的心肌，從而導致了急性心肌梗死后慢性心功能不全發(fā)生率的上升。而長期以來人們認為心臟是一個分化終末的器官，而近年來發(fā)現(xiàn)心臟存在能夠增殖分化干細胞，這使得修復損傷心肌成為可能，而這類細胞中以c-kit+心臟干細胞的修復能力最強。明確在自然病程狀態(tài)下，急性心肌梗死后

2、c-kit+心臟干細胞的增殖和分化狀態(tài)對我們進一步認識心臟干細胞、利用干細胞開展治療有很大幫然，然而至今極少研究涉及這一問題。因此本課題選擇在無任何干預狀態(tài)下觀察心臟c-kit+陽性心臟干細胞增生和分化的時序變化。
　　研究目的:
　　本研究采用開胸冠脈結扎法制備大鼠心肌缺血動物模型，利用組織學和免疫熒光技術研究急性心肌梗死后的病理改變，c-kit+陽性心臟干細胞增殖狀態(tài)、數(shù)量、和位置隨時間改變的情況，以及這類細胞的最終分化

3、方向。
　　研究方法:
　　選取SD大鼠25只，雌雄不限，有復旦大學上海醫(yī)院動物實驗中心提供，體重170±10g。將動物隨分配到5個組（每組各5只）:分別為對照組（假手術組）、急性心肌梗死后1天組、急性心肌梗死后3天組、急性心肌梗死后7天組及急性心肌梗死后28天組。以開胸結扎大鼠冠狀動脈左前降支的方法制備大鼠急性心肌梗死模型，對照組僅開胸置縫線，不結扎，術后連續(xù)腹腔注射青霉素3天。用肢體導聯(lián)心電圖評估造模成功與否。造模成功后

4、，分別于術后1天、3天、7天及28天，以過量戊巴比妥鈉麻醉動物，開胸取心臟，切下梗死心肌后于甲醛溶液中侵泡72小時，后制成石蠟切片，分別進行HE染色、Masson染色、c-kit免疫熒光染色、ki-67免疫熒光染色、GATA4免疫熒光染色，Nkx2.5免疫熒光染色。免疫熒光染色時以PBS代替一抗做陰性對照。用光學纖維鏡觀察HE染色、Massoon染色切片，已明確急性心肌梗死后心臟組織學改變，熒光顯微鏡觀察免疫熒光片和并采集圖片，以觀察心

5、臟c-kit心臟干細胞數(shù)量、位置及增值狀態(tài)隨時間變化的變化。
　　研究結果:
　　(1)開胸結扎冠狀動脈左前降支后，左室前壁蒼白，左心耳充血，心室收縮活動減弱，心電圖肢體導聯(lián)ST段抬高，顯示模型制備成功。
　　(2)HE及Masson染色顯示梗死區(qū)位于左室前壁及室間隔前部，梗死部位核消失、肌纖維排列紊亂，炎癥細胞浸潤，后期纖維結締組織增生，替代壞死心肌組織，新生毛細血管形成。驗證了經(jīng)典急性缺血后的心肌病例變化。

6、　　(3)以免疫熒光顯微鏡觀察熒光染色切片，結果提示在壞死相關區(qū)域，c-kit陽性表達在心肌梗死1天未見較對照組的明顯差異，3天后較對照組顯著上升，7天時達到高峰，28天后較對照組無明顯差異,c-kit主要表達于缺血壞死相關區(qū)域，在未受缺血損傷心肌較對照組無明顯差異。Ki-67的表達與c-kit相吻合，在心肌梗死1天未見較對照組的明顯差異，3天后較對照組顯著上升，7天時達到高峰，28天后較對照組無明顯差異，但其表達呈現(xiàn)全心增多，不僅限制

7、于缺血梗死相關區(qū)域。GATA4及Nkx2.5的在梗死后早期表達升高，位于核內(nèi)，梗死晚期其表達下降，主要位于核周。
　　結論:
　　1、本研究通過開胸冠狀動脈結扎法成功制作了大鼠急性心肌梗死模型，驗證心梗后心臟組織學改變，這一過程以心肌細胞大量壞死、炎癥細胞浸潤及肉芽組織增生壞死部位纖維化為突出特征，最終導致梗死部位心肌厚度下降，瘢痕形成，收縮功能消失。
　　2、在無外界干預的大鼠急性心肌梗死模型中，早起缺血相關區(qū)域c-