1、納米晶體、納米管等無(wú)機(jī)材料具有特殊的結(jié)構(gòu)特征，在一些小分子(核酸或蛋白質(zhì))的檢測(cè)中顯示出很好的性能。單壁碳納米管(SWNTs)能夠與寡核苷酸的堿基通過(guò)π-π非共價(jià)鍵作用形成穩(wěn)定的狀態(tài)。同時(shí)SWNTs具有抗光漂白作用以及近紅外波長(zhǎng)的熒光特性?？稍谏茖W(xué)研究中作為熒光探針的載體。本文以SWNTs為載體，借助熒光染料SYBR Green I(SG)特殊的熒光性質(zhì)，對(duì)沙門氏菌屬的兩種血清型鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌進(jìn)行快速檢測(cè)，主要展開(kāi)以下

2、兩個(gè)方面的工作：
　　 1.檢測(cè)含trps基因的鼠傷寒沙門氏菌。本研究方法利用熒光的淬滅和恢復(fù)對(duì)含trps基因的鼠傷寒沙門氏菌進(jìn)行檢測(cè)，SWNTs對(duì)寡核苷酸(ssDNA)特異的結(jié)合作用和SG對(duì)核酸分子(包括ssDNA和dsDNA)特異的插入作用及極強(qiáng)靈敏性，建立一種快速檢測(cè)含trpS基因的鼠傷寒沙門氏菌的方法。在本檢測(cè)體系中，單獨(dú)存在的SG分子是幾乎不能產(chǎn)生熒光信號(hào)的。當(dāng)加入探針?lè)肿?ssDNA)后，由于SG和探針DNA的插入作

3、用能夠檢測(cè)到SG的熒光信號(hào)(520nm)。隨后，SWNTs的加入，由于SWNTs選擇性的與探針DNA的非共價(jià)作用使得探針DNA分子與SG分離，SG游離而不發(fā)熒光，SWNTs間接的淬滅了SG的熒光。當(dāng)加入靶序列后，靶序列通過(guò)與探針DNA分子的雜交作用迅速的形成雙鏈的DNA分子(dsDNA)而脫離SWNTs的吸附作用，SG插入到雙鏈DNA分子中，熒光信號(hào)得到恢復(fù)。而加入誤配堿基序列和其它菌的DNA時(shí)，SG的熒光強(qiáng)度不會(huì)恢復(fù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通

4、過(guò)檢測(cè)SG熒光的變化可對(duì)攜帶trps基因的鼠傷寒沙門氏菌進(jìn)行檢測(cè)，而且此方法具有高的靈敏性和特異性。通過(guò)該方法，濃度為1.8nM的目標(biāo)DNA可以得到檢測(cè)。用該方法，在僅僅只加入終濃度為1.8nM目標(biāo)DNA的情況下，熒光值的恢復(fù)率達(dá)到了78％。熒光值的增強(qiáng)值達(dá)到4.54。特異性檢測(cè)的結(jié)果也證明該檢測(cè)方法可以區(qū)分具有高同源性的核酸序列(1-或3-nt的區(qū)別)。此外，這種方法用于含有trps基因的鼠傷寒沙門氏菌的實(shí)際樣本也有很好的效果，在用菌

5、中提取的DNA的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí)，熒光信號(hào)的恢復(fù)效果非常好，熒光值的增強(qiáng)值達(dá)到了3.15。
　　 2.檢測(cè)腸炎沙門氏菌的16SrRNA。本研究方法利用熒光的淬滅和恢復(fù)對(duì)腸炎沙門氏菌的16SrRNA進(jìn)行檢測(cè)，SWNTs對(duì)寡核苷酸(ssDNA)共價(jià)的聯(lián)接作用以及特異的非共價(jià)結(jié)合作用和SG對(duì)核酸分子(包括ssDNA和dsDNA)特異的插入作用及極強(qiáng)靈敏性，建立一種快速檢測(cè)腸炎寒沙門氏菌16SrRNA的方法。在本檢測(cè)體系中，單獨(dú)存在的S

6、G分子是幾乎不能產(chǎn)生熒光信號(hào)的。采用一段特異識(shí)別腸炎沙門氏菌的DNA探針來(lái)特異識(shí)別腸炎沙門氏菌的基因組DNA，而通過(guò)識(shí)別熒光染料SYBRGreenI(SG)的信號(hào)來(lái)實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。該段DNA探針首先將通過(guò)連接反應(yīng)共價(jià)的修飾到碳納米管上并將通過(guò)吸附作用纏繞在碳納米管管壁上，而當(dāng)體系里加入腸炎沙門氏菌的基因組DNA時(shí)，該段核酸序列的游離端將從碳納米管上解纏繞下來(lái)，隨后與目標(biāo)DNA發(fā)生雜交反應(yīng)形成雙鏈結(jié)構(gòu)并與熒光染料SG結(jié)合產(chǎn)生信號(hào)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，

7、通過(guò)檢測(cè)SG熒光的變化可對(duì)腸炎沙門氏菌進(jìn)行檢測(cè)，而且此方法具有高的靈敏性和特異性。通過(guò)該方法，濃度為1.8nM的目標(biāo)DNA可以得到檢測(cè)。對(duì)于腸炎沙門氏菌16SrRNA的檢測(cè)，用該方法，在僅僅只加入終濃度為1.8nM目標(biāo)DNA的情況下，熒光值的恢復(fù)率達(dá)到了84%。熒光值的增強(qiáng)值達(dá)到13.16。此外，這種方法用于腸炎沙門氏菌16SrRNA基因組的實(shí)際樣本檢測(cè)也有很好的效果，在用菌中提取的DNA的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí)，熒光信號(hào)的恢復(fù)效果非常好，熒