大鼠CRX基因克隆及pEGFP-C3-CRX真核表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究的目的是: 1.克隆大鼠視錐細(xì)胞．視桿細(xì)胞同源結(jié)構(gòu)域(cone-rod homeoboxgene，CRX)基因。 2.構(gòu)建pEGFP-C3/CRX真核表達(dá)載體。 方法： 1.以SD大鼠的眼的總RNA為模板，采用RT-PCR的方法擴(kuò)增一段約1000bp的eDNA片段，亞克隆至PMDl8-T載體中，并進(jìn)行序列分析，對測序結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析。 2.抽提pEGFP-C3質(zhì)粒，對PMDl8-T

2、/CRX重組質(zhì)粒和pEGFP-C3質(zhì)粒同時(shí)進(jìn)行限制性內(nèi)切酶SalI、sacI酶切，構(gòu)建pEGFP-C3/CRX真核載體，并進(jìn)行序列分析． 結(jié)果： 1.與Sakamoto報(bào)道的序列相比較，本實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增的序列包含了大鼠CRX基因5'端非翻譯區(qū)部分序列、編碼區(qū)的全部序列和3'端非翻譯區(qū)部分序列，除位于編碼區(qū)的第450位堿基A→T外，其他序列與報(bào)道完全一致。經(jīng)軟件分析，堿基序列“CTG”或“CAG”均編碼同一氨基酸-甘氨酸(Gly

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