1、背景及目的:淋巴道轉移早是三陰性乳腺癌預后極差的一個重要原因,其早期發(fā)生淋巴道轉移高達50％以上。研究證實,癌細胞向淋巴管的侵襲轉移除了與癌細胞的侵襲遷移能力相關外,還涉及到癌組織中淋巴管的新生。目前大多數(shù)研究認為VEGF-D是特異性的淋巴管生成因子,它與VEGFR-3結合可導致VEGFR-3胞內區(qū)酪氨酸磷酸化,觸發(fā)絲裂原蛋白激酶(MAPK)級聯(lián)反應,啟動轉錄,引起淋巴內皮細胞分裂、增殖,從而導致淋巴管的生成。近年來眾多研究證實TGF-

2、β1與腫瘤的發(fā)生、進展和轉移密切相關。但關于TGF-β1對三陰性乳腺癌淋巴道轉移的影響及其機制研究的較少。目前又有多項體外研究證實,p38 MAPK信號通路在癌細胞的侵襲轉移過程中發(fā)揮著重要作用。那么,它們之間究竟有沒有關系,是什么樣的關系?需要不斷地研究予以解答。
　　 本實驗應用人三陰性乳腺癌細胞系MDA-MB-231,在細胞水平探究TGF-β1能否增強MDA-MB-231的遷移能力,以及能否上調VEGF-D的表達從而促進三

3、陰性乳腺癌淋巴道轉移。并在此基礎上,探討p3g MAPK信號通路是否參與其中。
　　 方法:MTT比色法檢測TGF-β1對三陰性乳腺癌細胞系MDA-MB-231增殖的影響。并探求TGF-β1調控其增殖的濃度效應和時間效應。劃痕實驗檢測TGF-β1對MDA-MB-231遷移能力的影響,同時探討該過程與p38 MAPK信號通路的相關性。利用Western Blot和ELISA檢測TGF-β1對MDA-MB-231細胞VEGF-D表達

4、的影響,并探究該過程是否與p38 MAPK信號通路相關。
　　 結果:低濃度TGF-β1(5.0ng/ml)對MDA-MB-231細胞的增殖有一定的抑制作用。隨著劑量的增加和時間的延長,這種抑制作用變得不明顯。劃痕實驗顯示不同濃度TGF-β1作用MDA-MB-231細胞24h,細胞的遷移能力均明顯增強;而預先應用p38特異性抑制劑阻斷p38 MAPK信號通路后,發(fā)現(xiàn)TGF-β1促進MDA-MB-231細胞遷移的作用被明顯抑制。W

5、estern Blot和ELISA共同證實TGF-β1能夠促進MDA-MB-231細胞分泌VEGF-D;而預先應用p38特異性抑制劑阻斷p38 MAPK信號通路,TGF-β1上調VEGF-D的作用受到明顯抑制。
　　 結論:
　　 1.TGF-β1對三陰性乳腺癌細胞MDA-MB-231的增殖有一定的抑制作用。隨著劑量的增加和時間的延長,這種抑制作用逐漸消失。
　　 2.TGF-β1能夠促進MDA-MB-231細胞