1、當(dāng)前環(huán)境問題日益突出，因施用化學(xué)農(nóng)藥造成的健康問題更是引人矚目，因此需要開發(fā)可替代化學(xué)農(nóng)藥或者補(bǔ)充性的生物農(nóng)藥來保護(hù)環(huán)境。由于所有的昆蟲都易受昆蟲病原真菌感染而致病，因此昆蟲病原真菌的傳播和擴(kuò)散會造成大面積的昆蟲群體因感染昆蟲病原真菌而死亡。故利用昆蟲病原真菌控制農(nóng)業(yè)害蟲實(shí)施生物控制和病蟲害綜合治理是保護(hù)綠色環(huán)境的重要途徑之一。在昆蟲病原真菌的生活史中，首先是孢子遇到昆蟲后通過分泌的黏液附著到昆蟲體表，同時孢子膨大，緊接著萌發(fā)產(chǎn)生芽管。

2、芽管在昆蟲體表找到合適的位點(diǎn)后開始進(jìn)行穿透。緊接著芽管的頂端開始膨大產(chǎn)生附著胞；附著胞進(jìn)而產(chǎn)生穿透釘；穿透釘透過表皮進(jìn)入昆蟲血腔；進(jìn)入血腔后，菌絲由絲狀轉(zhuǎn)變?yōu)榻湍笭畹南x菌體；蟲菌體以血腔中的血液為營養(yǎng)迅速繁殖生長；昆蟲死亡后，昆蟲病原真菌從血腔內(nèi)穿透皮層再次產(chǎn)生分生孢子進(jìn)入下一個周期。植物病原真菌和昆蟲病原真菌具有相似的侵染過程。植物病原真菌侵染過程中與植物抗性基因?qū)?yīng)的基因稱為無毒基因，包括細(xì)胞骨架蛋白和絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶等無毒

3、基因。與植物病原真菌無毒基因?qū)?yīng)的昆蟲病原真菌基因，如β-tubulin和絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶Ppt1，在昆蟲病原真菌中的功能了解甚少，研究它們的功能對于了解昆蟲病原真菌的致病機(jī)制和殺蟲真菌農(nóng)藥的研制具有重要意義。
　　β-tubulin是組成微管的基本單元之一，微管又是構(gòu)成細(xì)胞骨架的成分。β-tubulin參與多種細(xì)胞生物學(xué)過程。本文采用基因敲除和回復(fù)的方法研究了β-tubulin基因?qū)染G僵菌的細(xì)胞形態(tài)、產(chǎn)孢、抗逆和毒力的

4、影響。敲除β-tubulin基因后削弱了蝗綠僵菌正常的細(xì)胞核分離、脂滴的運(yùn)輸、幾丁質(zhì)到隔的沉積；導(dǎo)致菌絲彎曲，并形成菌落密實(shí)填集的褶皺形態(tài)；孢子梗減少、產(chǎn)孢量顯著下降。與野生型和回復(fù)菌株相比，敲除β-tubulin基因顯著削弱了蝗綠僵菌的侵染蝗蟲的毒力，侵染結(jié)構(gòu)會產(chǎn)生二叉型芽管、附著胞形成率顯著下降，附著胞的形態(tài)異常且膨壓下降；β-tubulin基因缺失后，蝗綠僵菌在蝗蟲活體內(nèi)和離體蝗蟲血清中生長顯著減緩。與野生型和回復(fù)菌株相比，敲除β

5、-tubulin基因后蝗綠僵菌孢子對紫外、熱等逆境的耐受性無顯著變化。因此，β-tubulin對蝗綠僵菌菌絲生長、產(chǎn)孢和毒力有重要作用，對抗逆特性無明顯影響。
　　絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶Ppt1(酵母)/PP5(人)包含一個特有的三肽重復(fù)序列，主要調(diào)節(jié)生長、分化、DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞周期，參與熱激反應(yīng)的信號傳導(dǎo)。但是Ppt1/PP5在絲狀真菌中的功能至今還未見報(bào)道。本研究敲除絲狀真菌蝗綠僵菌的Ppt1基因后菌落形態(tài)顯著性改變，產(chǎn)

6、孢方式發(fā)生改變：從正常產(chǎn)孢變?yōu)槲⒀h(huán)產(chǎn)孢；MaPpt1敲除菌株的熱激反應(yīng)和毒力沒有變化，但紫外耐受性能力顯著提高。eGFP-MaPpt1蛋白的融合表結(jié)果達(dá)表明MaPpt1在生長的菌絲中定位在隔上，在孢子中分散在整個細(xì)胞質(zhì)中。通過磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)了MaPpt1（ΔMaPpt1 vs WT）作用的11個潛在靶標(biāo)蛋白，數(shù)字表達(dá)譜分析發(fā)現(xiàn)MaPpt1可能調(diào)控的基因1846個，兩種方法的研究結(jié)果共同揭示MaPpt1參與了包括脂肪酸代謝，細(xì)