1、目的:糖尿病腎病(DN)是糖尿病的嚴(yán)重微血管并發(fā)癥，已成為西方國家終末期腎病的主要原因。近年來研究表明固有免疫介導(dǎo)的炎癥是糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。固有免疫系統(tǒng)是機(jī)體抵抗病原體的第一道防線，它通常參與炎癥的啟動(dòng)和擴(kuò)展，通過模式識(shí)別受體激活以識(shí)別“自己”和“異己”分子抗原。模式識(shí)別受體可通過損傷相關(guān)分子模式和病原相關(guān)分子模式識(shí)別危險(xiǎn)信號(hào)，啟動(dòng)炎癥反應(yīng)，以應(yīng)答環(huán)境中的感染和組織損傷。核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（即NLRP3）炎癥

2、小體是固有免疫系統(tǒng)的一員，可被內(nèi)源性和外源性危險(xiǎn)信號(hào)激活，繼而觸發(fā)固有免疫，導(dǎo)致胱天蛋白酶Caspase-1激活，促進(jìn)促炎細(xì)胞因子IL-1β、IL-18、IL-33的成熟和分泌，放大促炎反應(yīng)。越來越多證據(jù)表明NLRP3炎癥小體在各種炎癥性疾病中起著重要作用，促炎細(xì)胞因子在炎癥過程中起重要調(diào)節(jié)作用。血漿游離脂肪酸升高可以導(dǎo)致脂毒性的發(fā)生，具有脂毒性的游離脂肪酸可刺激組織釋放炎癥因子，并與這些炎癥因子共同作用，造成機(jī)體代謝器官長(zhǎng)期處于低度炎

3、癥狀態(tài)。然而游離脂肪酸是否在腎小球系膜細(xì)胞激活NLRP3炎癥小體并參與腎臟炎癥的發(fā)生尚不清楚。因此，本研究通過觀察NLRP3炎癥小體信號(hào)通路在棕櫚酸以及活性氧(ROS)抑制劑NAC作用下腎小球系膜細(xì)胞的表達(dá)，旨在探討高脂介導(dǎo)的NLRP3炎癥小體信號(hào)通路在腎臟炎癥反應(yīng)中的作用及相關(guān)機(jī)制，找到以NLRP3炎癥小體信號(hào)通路為治療靶點(diǎn)的新思路。
　　方法:(1)細(xì)胞培養(yǎng)及分組:體外培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細(xì)胞，以棕櫚酸(PA)作為刺激因子，活性

4、氧抑制劑NAC作為阻斷劑，分別設(shè)置以下三組:①正常對(duì)照組（NC組）:培養(yǎng)基含5.6 mmol/L葡萄糖;②棕櫚酸組（HPA組）:設(shè)定棕櫚酸濃度梯度3個(gè)組，HPA1組:培養(yǎng)基含0.05 mmol/L棕櫚酸; HPA2組:培養(yǎng)基含0.1 mmol/L棕櫚酸;HPA3組:培養(yǎng)基含0.15 mmol/L棕櫚酸;③高棕櫚酸+NAC組(NAC+HPA組):0.15 mmol/L棕櫚酸培養(yǎng)基內(nèi)預(yù)先加入10μ mol/L NAC阻斷活性氧的產(chǎn)生，以觀察

5、活性氧在棕櫚酸激活NLRP3炎癥小體信號(hào)中的作用。(2)各組細(xì)胞分別培養(yǎng)6h、9h、12h后，使用蛋白免疫印跡法和RT-PCR分別檢測(cè)各組NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA的表達(dá)。(3)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，各組間比較使用單因素方差分析，兩兩比較使用q檢驗(yàn)，組內(nèi)比較使用獨(dú)立樣本均數(shù)t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

6、r>　　結(jié)果:(1)棕櫚酸刺激系膜細(xì)胞NLRP3炎癥小體信號(hào)分子的表達(dá)變化:與正常對(duì)照組相比，不同作用濃度和時(shí)間的棕櫚酸組均可上調(diào)NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白及mRNA表達(dá)（P＜0.05），且呈一定的濃度和時(shí)間依賴性，其中NLRP3以0.15mmol/L棕櫚酸作用9h表達(dá)最強(qiáng);Caspase-1、IL-1β以0.15mmol/L棕櫚酸作用12h表達(dá)最強(qiáng)。(2)NAC干預(yù)阻斷活性氧后，棕櫚酸作用的腎小球系膜細(xì)胞NLRP3