1、雞與鵪鶉的遠(yuǎn)緣雜交存在著一定程度的不親和性，其雜交種胚胎早期出現(xiàn)大量的死亡，且其死亡原因到目前為止仍未得到很好地解釋，是世界難題。雜交種胚胎早期死亡的時(shí)間是研究其死亡原因的一個(gè)重要因素，因此很有必要對(duì)雜交種早期胚胎大批死亡的確切時(shí)間進(jìn)行分析。目前研究發(fā)現(xiàn)雜交種蛋入孵的3～5天前胚胎中還有公有母，而在以后各個(gè)孵化階段以及出殼后幾乎全部為雄性，表明胚胎死亡也很可能與其性別分化有關(guān)。而且有研究發(fā)現(xiàn)早期胚胎mRNA表達(dá)的差異也是導(dǎo)致了雜交種胚胎

2、早期死亡率升高的原因，表明雜交種胚胎早期死亡與某種功能基因的表達(dá)差異也存在著一定關(guān)系。本研究主要分析雜交種早期胚胎蛋白表達(dá)的差異，然后對(duì)蛋白表達(dá)差異的雜交種胚胎性別鑒定，最后探討其表達(dá)差異蛋白的個(gè)體與性別的關(guān)系而展開本實(shí)驗(yàn)。 本實(shí)驗(yàn)以雞(♂)與鵪鶉(♀)正交組合雜交種的早期胚胎為研究對(duì)象，雜交種蛋入孵66～186 h的不同時(shí)間點(diǎn)采樣，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取8個(gè)活胚，共取雜交禽活胚116個(gè)。實(shí)驗(yàn)分5批在其孵化不同時(shí)段取雜交種蛋1494枚，除

3、了19枚因?yàn)樯ⅫS，10枚因?yàn)榈皻て屏训韧庠谠驅(qū)е碌乃劳鐾?，其中?60例死亡，其中555例十分相似，發(fā)現(xiàn)555例死亡胚胎的形態(tài)均和雜交種胚胎在72±6h的形態(tài)相似，結(jié)果得出雜交種早期胚胎大批死亡的確切的時(shí)間應(yīng)為72±6h。 公雞提供Z染色體，母鵪鶉提供Z、W染色體，子一代中雌性的W染色體應(yīng)來自母鵪鶉，應(yīng)用鑒定鵪鶉性別的引物來鑒定雜交種的性別。根據(jù)鵪鶉Wpkci基因特異片段，先后設(shè)計(jì)5對(duì)引物和引用1對(duì)引物用于鑒定雜交種性別。其中

4、用合成的Owpkcil引物和β-actin引物在同一體系性別鑒定時(shí)，已知性別的鵪鶉擴(kuò)增結(jié)果是雌性鵪鶉出現(xiàn)兩條特異條帶347bp(Qwpkcil)和425bp(β-actin)，雄性鵪鶉出現(xiàn)一條帶425bp(β-actin)；雜交種條帶有兩條帶和一條帶之分。對(duì)成年雜交種性別鑒定時(shí)，只出現(xiàn)一條帶425bp(β-actin)。 細(xì)微剖解雜交禽種蛋1494枚，分5批在不同孵化時(shí)段共取活胚116個(gè)作為實(shí)驗(yàn)組;細(xì)微剖解鵪鶉和雞的種蛋共328

5、枚，分2批在不同孵化時(shí)段各取活胚120個(gè)作為對(duì)照組；對(duì)雜交種早期胚胎SDS-PAGE分析，以對(duì)雞早期胚胎、鵪鶉早期胚胎SDS-PAGE分析為對(duì)照，發(fā)現(xiàn)大小為66200Da左右的蛋白條帶在雜交種早期胚胎表達(dá)時(shí)出現(xiàn)了差異，而鵪鶉、雞在此處都高度一致。72h雞和鵪鶉雜交種胚胎蛋白在66200Da左右處出現(xiàn)了明顯的亮帶。性別鑒定后發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)亮帶的個(gè)體為雌性，未出現(xiàn)亮帶的為雄性。72h大小為66200Da左右的蛋白條帶的過度表達(dá)很可能是造成雜交種雌