1、抗菌肽是生物體內(nèi)誘導(dǎo)表達(dá)具有廣譜抗菌活性的小分子多肽。這些多肽是生物體非專一性的免疫應(yīng)答產(chǎn)物，是生物體內(nèi)免疫系統(tǒng)的重要成分。 目前國(guó)內(nèi)關(guān)于豬源抗菌肽的研究，主要針對(duì)于豬的小腸中的抗菌肽，而豬血中抗菌肽的提取及抗菌活性研究在國(guó)外雖已有少量報(bào)道，在國(guó)內(nèi)卻未見(jiàn)報(bào)道。由于豬血液中自細(xì)胞是免疫系統(tǒng)中起主要作用的免疫細(xì)胞，而其中性粒細(xì)胞約占白細(xì)胞總量的70％，從豬血液中性粒細(xì)胞中分離提取抗菌肽也就比較合理。因此本實(shí)驗(yàn)采用從豬血液中性粒細(xì)胞中

2、分離提取小分子多肽，根據(jù)小分子多肽抗菌活性特點(diǎn)進(jìn)而分離鑒定出抗菌多肽。同時(shí)，通過(guò)優(yōu)化提取工藝，提高抗菌肽的得率和含量。 1.提取部分 本實(shí)驗(yàn)以新鮮豬血中性粒細(xì)胞中的活性小分子多肽為研究對(duì)象，取新鮮豬血抗凝、離心，再經(jīng)超聲波處理、乙酸浸提，又經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex G25、Sephadex G100的過(guò)濾層析，超濾裝置分離20KD以下的小分子多肽，并將每一步收集的組分測(cè)定其抗菌活性，收集具有抗菌活性的部分。將具有活性

3、的組分進(jìn)行Tricine SDS-PAGE電泳，分析獲得兩條主帶，分子量分別約為6KD和15KD。再做AU-PAGE電泳，獲得的膠使用凝膠覆蓋測(cè)定法測(cè)定兩條主帶的抗菌活性，最終確定分子量約為6KD的小分子多肽具有抗菌活性。 2.抑菌試驗(yàn)部分鑒于現(xiàn)在已知的抗菌肽大多只在體外具有抗菌活性，而在動(dòng)物體內(nèi)幾乎沒(méi)有活性，本實(shí)驗(yàn)只進(jìn)行了體外抗菌活性試驗(yàn)。為確定抗菌肽具有廣譜抗菌活性的特點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)針對(duì)多種不同性質(zhì)的菌株進(jìn)行了抗菌活性測(cè)定。結(jié)果