1、目的：
　　 冠心病是中老年人的常見病和多發(fā)病，隨著飲食結(jié)構(gòu)等因素的變化，發(fā)病年齡日益年輕化，發(fā)病人數(shù)迅速上升，已成為引起死亡人數(shù)最多的十種疾病之一。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雖然對(duì)此病有藥物、手術(shù)、介入等多種療法，但仍有很多患者不適用于上述療法或效果不佳，治療性血管新生療法的產(chǎn)生為這些患者帶來了希望。已有數(shù)千年歷史的中醫(yī)藥雖然是這一新療法的踐行者，取得了很好的臨床療效，但由于理論認(rèn)識(shí)的差異性，導(dǎo)致中醫(yī)藥療法不能被廣泛接受。我們依據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)

2、識(shí)，并結(jié)合文獻(xiàn)及臨床研究，提出血脈不和是冠心病的基本病機(jī)，以調(diào)和血脈為內(nèi)涵的和血生絡(luò)法是本病的基本治法。通過建立實(shí)驗(yàn)性心肌梗死模型，觀察和血生絡(luò)法對(duì)心梗模型血管新生的影響，利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)、蛋白質(zhì)印跡等現(xiàn)代先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)觀察了bFGF、MMP-2/TIMP-2、G-CSF、AKT、ERK等指標(biāo)的變化，從生長因子、細(xì)胞外基質(zhì)、內(nèi)皮祖細(xì)胞、信號(hào)通路等多方面對(duì)促血管新生的機(jī)制進(jìn)行了探討，為和血生絡(luò)法廣泛應(yīng)用于臨床奠定了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。

3、
　　 第一部分
　　 中醫(yī)對(duì)冠心病和血管新生的認(rèn)識(shí)及和血生絡(luò)法的提出
　　 簡述了冠心病的概念、表現(xiàn)、分類、治療原則及常規(guī)治療方法。鑒于冠心病治療中存在的不足，介紹了本病治療中的新思路，即治療性血管新生。對(duì)其主要研究概況及應(yīng)用前景進(jìn)行了簡要?dú)w納。由于治療性血管新生目前僅限于理論研究和臨床前期階段，并不能實(shí)際應(yīng)用于臨床，而中醫(yī)的“脈絡(luò)”與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的“血管”對(duì)應(yīng)，血管新生與中醫(yī)學(xué)“生脈”等理論具有高度一致性，這就為

4、重新審視中醫(yī)藥的治療機(jī)制提供了新思路，也為中醫(yī)藥在冠心病的治療中發(fā)揮其良好的作用提供了廣闊前景。
　　 整理查閱了大量的古今中醫(yī)藥與冠心病相關(guān)的文獻(xiàn)，對(duì)與冠心病相關(guān)的中醫(yī)病名、臨床表現(xiàn)及鑒別進(jìn)行了整理歸納，同時(shí)分析了古今對(duì)冠心病病因病機(jī)及治療方法的認(rèn)識(shí)，結(jié)合我們的臨床體會(huì)提出了冠心病的基本病機(jī)是血脈失和，而“和血生絡(luò)法”是冠心病的基本治法。
　　 第二部分
　　 心肌梗死大鼠模型制備及“和血生絡(luò)法”促血管新生的作

5、用
　　 方法：
　　 健康雄性Wistar大鼠通過結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支建立實(shí)驗(yàn)性心肌梗死動(dòng)物模型。選取造模成功大鼠48只，按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為模型組(M)、消心痛組(Y)、和血生絡(luò)低劑量組(D)、和血生絡(luò)高劑量組(G)，每組12只；另設(shè)假手術(shù)組(J)大鼠12只。術(shù)后24h灌胃給藥，藥物干預(yù)3周后，每組取6只大鼠心臟以TTC染色法測(cè)定大鼠左室心肌梗死范圍；每組取另6只大鼠心臟免疫組化方法檢測(cè)心肌梗死邊緣區(qū)CD34表達(dá)

6、，檢測(cè)微血管數(shù)量和微血管密度。同時(shí)應(yīng)用HE染色觀察梗死邊緣區(qū)的病理變化。
　　 結(jié)果：
　　 1 大鼠一般狀況的觀察比較
　　 大鼠呈蜷縮狀態(tài)，精神萎靡，活動(dòng)較少，毛發(fā)黃白色枯槁無光澤且多倒豎，進(jìn)食量明顯減少。抓握大鼠時(shí)無反抗或反抗較輕。假手術(shù)組大鼠手術(shù)后1天，食欲和運(yùn)動(dòng)量即恢復(fù)至術(shù)前狀態(tài)，毛發(fā)平滑光澤無枯槁現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)進(jìn)程中，模型組大鼠仍然表現(xiàn)出飲食、活動(dòng)少的狀態(tài)，因而出現(xiàn)增重緩慢，甚至無增重的情況。皮毛狀態(tài)未見

7、明顯改觀。各用藥物組大鼠精神狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn)，表現(xiàn)出不同程度增重，尤以和血生絡(luò)大劑量組最為明顯。
　　 2 心肌梗死范圍
　　 假手術(shù)組大鼠未出現(xiàn)心肌梗死。模型組大鼠心肌梗死范圍為(29.6±1.4)％，和血生絡(luò)高劑量組、低劑量組及消心痛組大鼠心肌梗死范圍分別為（19.5±2.2）％、（22.0±2.3）％、(26.1±2.5)％。各治療組梗死范圍均明顯小于模型組(P＜0.05)，和血生絡(luò)高劑量組、和血生絡(luò)低劑量組明顯優(yōu)于消

8、心痛組(P＜0.05)，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3 心肌梗死邊緣區(qū)微血管數(shù)量(MVC)和微血管密度(MVD)
　　 假手術(shù)組大鼠MVC/MVD為75.50±4.29，模型組大鼠為88.50±2.44，較假手術(shù)組大鼠顯著增高(P＜0.05)。和血生絡(luò)高劑量組、低劑量組及消心痛組大鼠MVC/MVD分別為133.90±6.50、122.03±2.68、117.50±3.68。各治療組明顯高于模型組(P＜0.05)。和血生絡(luò)

9、高劑量組明顯優(yōu)于和血生絡(luò)低劑量組及消心痛組（P＜0.05）。
　　 4 病理組織變化
　　 模型組高倍鏡下部分心肌細(xì)胞腫脹，間質(zhì)水腫，梗死灶可見心肌纖維溶解，纖維組織增生、炎細(xì)胞浸潤。和血生絡(luò)低劑量組、消心痛組表現(xiàn)為心肌細(xì)胞壞死較模型組少見，少量炎細(xì)胞浸潤，纖維組織增生少見。和血生絡(luò)高劑量組大多數(shù)心肌細(xì)胞無異常，個(gè)別心肌壞死、炎細(xì)胞浸潤，無明顯纖維增生。假手術(shù)組心肌細(xì)胞未見明顯異常，無纖維組織增生及炎細(xì)胞浸潤。
　

10、　 第三部分
　　 “和血生絡(luò)法”對(duì)堿性成纖維細(xì)胞生長因子的影響
　　 方法：
　　 健康雄性Wistar大鼠通過結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支建立實(shí)驗(yàn)性心肌梗死動(dòng)物模型。選取造模成功大鼠48只，按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為模型組(M)、消心痛組(Y)、和血生絡(luò)低劑量組(D)、和血生絡(luò)高劑量組(G)，每組12只；另設(shè)假手術(shù)組(J)大鼠12只。術(shù)后24h灌胃給藥，藥物干預(yù)3周后，每組取6只大鼠心臟免疫組化法檢測(cè)bFGF在大鼠心

11、梗邊緣區(qū)中的蛋白表達(dá)，用HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)分析其平均灰度。每組取6只大鼠心臟組織RT-PCR法檢測(cè)bFGFmRNA在大鼠左室心肌組織的表達(dá)，用法國VL公司BIO-PROFIF凝膠圖象分析系統(tǒng)對(duì)目的電泳條帶進(jìn)行分析，以相應(yīng)的內(nèi)參電泳條帶作為參照，結(jié)果以兩者之積分吸光度的比值表示。每組取8只大鼠的血清ELISA法檢測(cè)bFGF在血清中的含量。
　　 結(jié)果：
　　 1 大鼠心梗邊緣區(qū)bFGF的蛋白表

12、達(dá)及其平均灰度
　　 模型組、假手術(shù)組平均灰度分別為197.83±5.55、218.20±3.55，模型組bFGF蛋白表達(dá)明顯高于假手術(shù)組(P＜0.05)。和血生絡(luò)高劑量組、和血生絡(luò)低劑量組、消心痛組平均灰度分別為163.02±6.56、174.93土2.66、176.80±3.59，bFGF蛋白表達(dá)較模型組明顯增高(P＜0.05)。和血生絡(luò)高劑量組較和血生絡(luò)低劑量組與消心痛組表達(dá)明顯增強(qiáng)（P＜0.05）。
　　 2 b

13、FGFmRNA在大鼠左室心肌組織的表達(dá)及積分吸光度的比值
　　 模型組（0.31±0.01）較假手術(shù)組（0.18±0.05）明顯增強(qiáng)(P＜0.05)。和血生絡(luò)高劑量組（0.69±0.17）、和血生絡(luò)低劑量組（0.49±0.04）、消心痛組(0.70±0.10)bFGFmRNA表達(dá)較模型組明顯增強(qiáng)(P＜0.05)。和血生絡(luò)高劑量組與消心痛組較和血生絡(luò)低劑量組表達(dá)明顯增強(qiáng)（P＜0.05）。
　　 3 bFGF在血清中的含量<

14、br>　　 模型組（3.78±0.25）血清中bFGF含量較假手術(shù)組（2.99±0.42）增高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。和血生絡(luò)低劑量組（4.32±1.29）亦較模型組增高但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。和血生絡(luò)高劑量組（5.29±1.13）、消心痛組（5.04±2.10）較模型組bFGF含量明顯增高(P＜0.05)。
　　 第四部分
　　 “和血生絡(luò)法”對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶-2及基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-2的影響

15、
　　 方法：
　　 健康雄性Wistar大鼠通過結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支建立實(shí)驗(yàn)性心肌梗死動(dòng)物模型。選取造模成功大鼠48只，按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為模型組(M)、消心痛組(Y)、和血生絡(luò)低劑量組(D)、和血生絡(luò)高劑量組(G)，每組12只；另設(shè)假手術(shù)組(J)大鼠12只。術(shù)后24h灌胃給藥，藥物干預(yù)3周后，每組取6只大鼠心臟免疫組化法檢測(cè)MMP-2及TIMP-2在大鼠心梗邊緣區(qū)中的蛋白表達(dá)，用HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)

16、學(xué)圖文分析系統(tǒng)分析其平均光密度值。并與bFGF作相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果：
　　 1 MMP-2在大鼠心梗邊緣區(qū)中的蛋白表達(dá)
　　 模型組(0.1490±0.0119)MMP-2蛋白表達(dá)較假手術(shù)組(0.0688±0.0072)明顯增高(P＜0.05)。和血生絡(luò)高劑量組（0.2545±0.0161）、和血生絡(luò)低劑量組（0.2174±0.0116）、消心痛組（0.2204±0.0109）MMP-2蛋白表達(dá)較模型組明顯

17、增高(P＜0.05)。和血生絡(luò)高劑量組強(qiáng)于消心痛組及和血生絡(luò)低劑量組（P＜0.05）。
　　 2 TIMP-2在大鼠心梗邊緣區(qū)中的蛋白表達(dá)
　　 模型組(0.1328±0.0104)TIMP-2蛋白表達(dá)較假手術(shù)組（0.0835±0.0085）明顯增高（P＜0.05）。和血生絡(luò)高劑量組（0.1878±0.0106）、消心痛組（0.1812±0.0105）較模型組TIMP-2蛋白表明顯增高（P＜0.05）。和血生絡(luò)低劑量組（

18、0.1690±0.0093）雖從數(shù)值看高于模型組，但并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 3 MMP-2與TIMP-2比值變化
　　 模型組（1.12±0.05）MMP-2/TIMP-2較假手術(shù)組明（0.82±0.03）顯增高(P＜0.05)。和血生絡(luò)高劑量組（1.36±0.04）、和血生絡(luò)低劑量組（1.29±0.04）、消心痛組（1.22±0.04）MMP-2/TIMP-2較模型組明顯增高(P＜0.05)。中藥組強(qiáng)于

19、消心痛組且和血生絡(luò)高劑量組強(qiáng)于和血生絡(luò)低劑量組(P＜0.05)。
　　 4 bFGF與MMP-2、MMP-2/TIMP-2的相關(guān)性分析
　　 將實(shí)驗(yàn)二心肌bFGF蛋白表達(dá)與MMP-2、MMP/TIMP的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果bFGF與MMP-2、MMP/TIMP的表達(dá)均呈正相關(guān)，r分別為0.967、0.926，P＜0.01。
　　 第五部分
　　 “和血生絡(luò)法”對(duì)粒細(xì)胞集落刺激因子的影響
　　

20、方法：
　　 健康雄性Wistar大鼠通過結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支建立實(shí)驗(yàn)性心肌梗死動(dòng)物模型。選取造模成功大鼠48只，按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為模型組(M)、消心痛組(Y)、和血生絡(luò)低劑量組(D)、和血生絡(luò)高劑量組(G)，每組12只；另設(shè)假手術(shù)組(J)大鼠12只。術(shù)后24h灌胃給藥，藥物干預(yù)3周后，每組取8只大鼠的血清ELISA法檢測(cè)G-CSF在血清中的含量。
　　 結(jié)果：
　　 1 血清中G-CSF的含量
　　

21、 模型組血清G-CSF含量為31.15±5.12較假手術(shù)組15.34土3.02明顯增高(P＜0.05)。和血生絡(luò)高劑量組、和血生絡(luò)低劑量組、消心痛組血清G-CSF含量分別為66.61±8.46、38.23±9.76、52.59±7.18較模型組明顯增高（P＜0.05）。和血生絡(luò)高劑量組、消心痛組較和血生絡(luò)低劑量組明顯增高（P＜0.05），且和血生絡(luò)高劑量組高于消心痛組(P＜0.05)。
　　 第六部分
　　 “和血生絡(luò)

22、法”對(duì)PI3K/Akt和MEK/ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響
　　 方法：
　　 健康雄性Wistar大鼠通過結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支建立實(shí)驗(yàn)性心肌梗死動(dòng)物模型。選取造模成功大鼠48只，按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為模型組(M)、消心痛組(Y)、和血生絡(luò)低劑量組(D)、和血生絡(luò)高劑量組(G)，每組12只；另設(shè)假手術(shù)組(J)大鼠12只。術(shù)后24h灌胃給藥，藥物干預(yù)3周后，每組取6只大鼠心臟組織RT-PCR法檢測(cè)AKTmRNA在大鼠左室心

23、肌組織的表達(dá)，用BIO-PROFIF凝膠圖象分析系統(tǒng)對(duì)目的電泳條帶進(jìn)行分析，以相應(yīng)的內(nèi)參電泳條帶作為參照，結(jié)果以兩者之積分吸光度的比值表示。每組取6只大鼠心臟組織Westernblot檢測(cè)ERK1/2在大鼠左室心肌組織的表達(dá)，用凝膠定量軟件Quantity-One-version4.6.2測(cè)定各條帶的積分吸光度，以積分吸光度代表蛋白質(zhì)的表達(dá)量。
　　 結(jié)果：
　　 1 AKTmRNA在大鼠左室心肌組織的表達(dá)
　　

24、 假手術(shù)組大鼠為0.17±0.01，模型組大鼠為0.26±0.02，較假手術(shù)組大鼠顯著增高(P＜0.05)。和血生絡(luò)高劑量組、和血生絡(luò)低劑量組及消心痛組大鼠分別為0.60±0.02、0.42土0.01、0.58±0.01。各治療組明顯高于模型組（P＜0.05）。和血生絡(luò)高劑量組與消心痛組明顯優(yōu)于和血生絡(luò)高低劑量組。和血生絡(luò)高劑量組明顯優(yōu)于消心痛組(P＜0.05)。
　　 2 ERK1/2在大鼠左室心肌組織的表達(dá)
　　 假

25、手術(shù)組大鼠為25470±1456，模型組大鼠為33703±488，較假手術(shù)組大鼠顯著增高(P＜0.05)。和血生絡(luò)高劑量組、低劑量組及消心痛組大鼠分別為54335±1021、40146土289、38361±1200，各治療組明顯高于模型組（P＜0.05）。和血生絡(luò)高劑量組明顯優(yōu)于和血生絡(luò)低劑量組及消心痛組（P＜0.05）。和血生絡(luò)低劑量組明顯優(yōu)于消心痛組（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1“和血生絡(luò)法”是冠心病的基

26、本治法。
　　 2 和血生絡(luò)法能夠縮小心肌梗死范圍，對(duì)大鼠心肌梗死具有治療作用。
　　 3 和血生絡(luò)法能夠增加心肌梗死邊緣區(qū)MVC/MVD，對(duì)缺血心肌具有促血管新生作用，從而有助于局部缺血狀態(tài)的改善。
　　 4 和血生絡(luò)法能增強(qiáng)心肌組織中bFGF蛋白和基因的表達(dá)，提高血清中bFGF的含量。由于bFGF是血管新生的重要生長因子，所以和血生絡(luò)法促進(jìn)bFGF產(chǎn)生是其促進(jìn)血管新生的機(jī)制之一。
　　 5 和血生絡(luò)法

27、能夠促進(jìn)MMP-2的分泌，改變MMP-2、TIMP-2的比例，從而促進(jìn)基底膜的降解，有利于內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和游走，為血管新生提供保障。
　　 6 和血生絡(luò)法能提高血清中G-CSF含量，而G-CSF是骨髓中內(nèi)皮祖細(xì)胞強(qiáng)有力的動(dòng)員劑，可間接推論和血生絡(luò)法通過動(dòng)員內(nèi)皮祖細(xì)胞進(jìn)入外周血而促進(jìn)血管新生。
　　 7 和血生絡(luò)方能明顯提高心肌中Akt及ERK1/2的表達(dá)量。說明和血生絡(luò)法可通過激活Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt