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文檔簡介
1、豬骨骼肌是一種高度異質性的組織類型,其中背最長肌和腰大肌作為豬最具經(jīng)濟價值且生理代謝迥異的兩種骨骼肌,一直是豬分子育種改良的研究重點。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA),尤其是環(huán)狀RNA(circular RNA,circRNA)作為繼microRNA之后調控性非編碼RNA的重要新成員,已成為生命科學研究的前沿熱點。然而相對于人和模式動物,豬lncRNA(包括circRNA)的鑒定和功能研究相當滯后
2、。本研究利用RNA-seq技術對豬背最長肌(LDM)和腰大肌(PMM)進行了轉錄組測序,并結合自行建立的生物信息學鑒定流程,對各測序文庫中的mRNA、lncRNA以及circRNA進行了分選鑒定以及深度分析,主要結果如下:
(1)豬LDM的肌纖維橫截面積(2.82×103μm2)顯著大于PMM肌纖維橫截面積(1.91×103μm2)(P<0.05)。
(2)豬LDM組織中Ⅱb型肌纖維(MyHC4,快速酵解型)的比例極
3、顯著的高于PMM組織(P<0.001),而PMM組織中Ⅰ型肌纖維(MyHC7,慢速氧化型)的含量極顯著高于LDM(P<0.001)。
(3)乳酸脫氫酶基因(LDHA)在LDM中的表達量極顯著地高于PMM(P<0.001),而丙酮酸脫氫酶基因(PDH1)的表達量在PMM中的表達量顯著地高于LDM(P<0.05)。PMM組織單個肌肉細胞中線粒體的拷貝數(shù)(1.13×103)顯著高于LDM組織單個細胞線粒體的含量(5.03×102)(
4、P<0.05)。
(4)在6個RNA測序文庫總共獲得約465 M(million)讀長為100 nt的雙末端原始讀段(raw reads),平均每個文庫獲得77.5±5.61的raw reads。共產(chǎn)生46.50 Gb(gigabases)的數(shù)據(jù),其中約有96.30%的raw reads達到質控標準被保留下來作為高質量讀段(cleanreads)。
(5) Cuffiinks在每個文庫中平均拼裝出101,800條轉錄
5、本,覆蓋了64.11%(35,054/54,675) RefSeq數(shù)據(jù)庫已注釋的轉錄本,同時覆蓋了85.86%(26,262/30,586)Ensembl數(shù)據(jù)庫已注釋的轉錄本;Scripture在每個文庫中平均組裝出50,886條轉錄本,覆蓋了37.9%(20,721/54,675) RefSeq數(shù)據(jù)庫中已注釋的轉錄本,同時覆蓋了67.02%(20,499/30,586) Ensembl數(shù)據(jù)庫已注釋的轉錄本。
(6)在兩種骨骼
6、肌組織文庫中共鑒定出40,148個可靠的mRNA轉錄本,包括15,106個已知的mRNA轉錄本和25,042個新mRNA轉錄本。其中共有40,060個mRNA在LDM和PMM組織中呈現(xiàn)出共表達模式,有58個mRNA特異性地表達于LDM組織,30個mRNA特異性地表達于PMM組織。
(7)本研究在LDM和PMM兩種骨骼肌組織中分別鑒定出21,936和22,954個可變剪接;共發(fā)現(xiàn)有19,514個SNVs和2.131個INDELs
7、,其中LDM中分別發(fā)現(xiàn)9,391個SNVs和1,023個INDELs,PMM中發(fā)現(xiàn)10,123 SNVs和1,108 INDELs。
(8)差異表達分析表明,共有217個mRNA的表達量在LDM與PMM組織之間存在顯著差異,其中73個mRNA在LDM中高表達,144個mRNA在PMM中高表達;LDM中高表達的差異mRNA主要富集在醣酵解、糖酵解/糖異生和葡萄糖分解代謝過程等生物學通路中,而PMM中高表達的差異mRNA轉錄本主要
8、富集于ECM受體互作、骨骼系統(tǒng)發(fā)育和肌肉器官發(fā)育等生物學通路中。
(9)在所有6個測序文庫中總共鑒定出326個lncRNA,包括297個IntergeniclncRNA,23個Intronic lncRNA和6個Antisense lncRNA。317(97.24%)個lncRNA在兩種骨骼肌組織中呈現(xiàn)出共表達模式,5(1.53%)個lncRNA特異性地表達于LDM組織,4個lncRNA(1.23%)特異性地表達于PMM組織。
9、
(10)本研究鑒定出的lncRNA與數(shù)據(jù)庫已知的lincRNA具有相似的基因組特征,然而與已知的蛋白編碼基因相比,lncRNA具有更少的外顯子數(shù)、更短的轉錄本和ORF長度、更低的蛋白編碼潛能。
(11)在2種骨骼肌組織中共鑒定出12個差異表達的lncRNA,其中包括1個Antisense lncRNA和11個Intergenic lncRNA,表達相關功能預測發(fā)現(xiàn)這些差異表達的lncRNA與骨骼肌糖酵解和氧化磷酸化
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