微生物拆分硫辛酸中間體6-羥基-8-氯辛酸乙酯.pdf_第1頁(yè)
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1、利用生物催化技術(shù)來(lái)合成手性化合物,其反應(yīng)條件溫和,選擇性強(qiáng),副反應(yīng)少,收率相對(duì)較高,光學(xué)純度高,環(huán)境污染較少,生產(chǎn)成本較低,因此受到越來(lái)越多的關(guān)注。本文對(duì)脂肪酶水解拆分外消旋的硫辛酸中間體6-羥基-8-氯辛酸乙酯制備(R)-6-羥基-8-氯辛酸乙酯進(jìn)行了研究,摘要如下: 對(duì)本實(shí)驗(yàn)室保藏的33株微生物菌株以及市售的8種活性干酵母進(jìn)行了篩選,建立了土壤中篩選的方法,篩選到了一株能夠選擇性拆分硫辛酸中間體6-羥基-8-氯辛酸乙酯的微生

2、物菌株T4,并對(duì)該菌進(jìn)行了初步鑒定,為革蘭氏陰性,產(chǎn)脂肪酶短桿菌。 確定了產(chǎn)脂肪酶菌株T4的酶活定義及測(cè)定方法,并在搖瓶中對(duì)T4菌株的發(fā)酵產(chǎn)酶條件進(jìn)行了優(yōu)化,篩選了發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源和氮源,確定了發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L):甘油40,豆餅粉20,蛋白胨5,尿素5,KH2PO45,MgSO4·7H2O1。發(fā)酵初始的pH為8.0,發(fā)酵溫度為37℃,發(fā)酵時(shí)間為24h。 優(yōu)化了微生物產(chǎn)酶菌株T4拆分外消旋6-羥基-8-氯辛酸乙酯水解反

3、應(yīng)的反應(yīng)條件,確定了該菌株催化拆分的最適反應(yīng)溫度為30℃,反應(yīng)體系最適pH為7.0,最適搖床轉(zhuǎn)速為170r/min。考查了添加劑的影響,確定了有效表面活性劑為CTAB。在此優(yōu)化條件下反應(yīng)8h,水解率和e.e.值分別為72.7%和92.8%,產(chǎn)率為27.3%。并利用6-羥基-8-氯辛酸乙酯和6-羥基-8-氯辛酸在不同pH下的溶解度不同,對(duì)轉(zhuǎn)化液進(jìn)行了初步分離,得到了(R)-6-羥基-8-氯辛酸乙酯,純度為89.4%,粗品產(chǎn)率為31.5%。

4、 考查了微生物產(chǎn)酶菌株T4凍干細(xì)胞在水/有機(jī)溶劑兩相體系中進(jìn)行的催化反應(yīng),篩選得到反應(yīng)介質(zhì)有機(jī)溶劑正辛烷,并考察了其與水相的相體積比為1/1時(shí)有利于催化反應(yīng)的進(jìn)行。在水/有機(jī)溶劑兩相體系的催化反應(yīng)增加了底物的溶解性,比較適宜的底物濃度是45mmol/L~70mmol/L。水/有機(jī)溶劑兩相體系中的反應(yīng)進(jìn)程明顯快于水相中反應(yīng),當(dāng)反應(yīng)進(jìn)行到6h的時(shí)候,此時(shí)的水解率為76.3%,e.e.值為91.3%,而水相中當(dāng)反應(yīng)進(jìn)行到8h的時(shí)候,水

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