γ-氨基丁酸產(chǎn)生菌的選育及發(fā)酵工藝研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本論文主要研究了發(fā)酵液中γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid,GABA)的測定方法、GABA產(chǎn)生菌的選育及產(chǎn)酸條件優(yōu)化,主要內(nèi)容及結(jié)果如下: 1)論文首先研究了GABA的測定方法,即用紙層析法定性分析GABA,紙層析-比色法定量分析GABA。確定了紙層析分析方法中展開劑和顯色劑的組成,展開劑組分正丁醇:冰醋酸:水(V/V):2:1:1為最優(yōu)比例,顯色劑茚三酮濃度為8g/L時較為合適,此時GABA和谷氨酸的Rf值有明

2、顯差異,分離效果最好。并確定了最佳分析條件:當波長在513nm處,顯色溫度為80℃、顯色時間和洗脫時間均為30min時,實驗效果最明顯。并制作了GABA含量與吸光度值的關(guān)系曲線,即GABA標準曲線,為常規(guī)檢驗樣品中的GABA含量提供了可靠的實驗依據(jù)。進一步對樣品重復(fù)性實驗、加標回收率等進行了分析,試驗結(jié)果表明,紙層析.比色法定量GABA的試驗方案重復(fù)性較好,相對標準偏差僅為0.272%,加標回收試驗的平均回收率為98.1%,說明此法測定

3、具有較高的可靠性,為后續(xù)研究工作奠定了基礎(chǔ)。 2)實驗從酸菜中分離、篩選到一株野生菌(乳酸菌35#),它能夠?qū)-谷氨酸鈉轉(zhuǎn)化為GABA,產(chǎn)量為1.85g/L,是一株很有潛力高產(chǎn)GABA的菌株。隨后對35#菌的形態(tài)學(xué)特征及生理生化特征進行了研究,在MRS培養(yǎng)基上30℃培養(yǎng)2d后,發(fā)現(xiàn)菌落較小,呈圓形乳白色,不透明,中間隆起,邊緣整齊,周邊有小皺紋,表面濕潤光滑。其分類學(xué)研究發(fā)現(xiàn):菌株為G+,兼性厭氧,石蕊牛乳試驗使石蕊變紅,不液

4、化明膠,不產(chǎn)硫化氫,V-P試驗陽性,不產(chǎn)過氧化氫酶,吲哚試驗陰性,甲基紅試驗陽性,葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,蔗糖、果糖、乳糖、甘露糖等發(fā)酵陽性,最適生長溫度28~34℃,最適生長pH6.5~7.5。根據(jù)《伯杰細菌鑒定手冊》,該菌株初步鑒定為乳酸鏈球菌。 3)實驗還對乳酸菌35#的發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件進行了優(yōu)化,得出培養(yǎng)基的組成(g/L):蔗糖10,丁二酸鈉10;胰蛋白胨5,酵母膏5;L-谷氨酸鈉10;優(yōu)化后的最佳發(fā)酵條件:培養(yǎng)基初始

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