1、本文研究目的：利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)原代培養(yǎng)骨巨細(xì)胞瘤單核基質(zhì)細(xì)胞(Stromal-like tumorcells，Stc)并進(jìn)行細(xì)胞鑒定，研究護(hù)骨素(Osteoprotegerin，OPG)對(duì)體外骨巨細(xì)胞瘤(Giant cell tumors，GCT)的抑制增殖、誘發(fā)凋亡的作用，為GCT新的輔助治療方案的確立提供初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究方法：用膠原酶-Ⅱ消化法體外分離培養(yǎng)8例新鮮GCT標(biāo)本進(jìn)行分離培養(yǎng)獲得原代Stc并進(jìn)行傳代：四種傳統(tǒng)

2、方法測(cè)定細(xì)胞的基本性質(zhì)；噻唑藍(lán)比色法(MTT)測(cè)OPG對(duì)Stc的細(xì)胞毒性作用：流式細(xì)胞儀(flow cytometer，F(xiàn)CM)檢測(cè)Stc細(xì)胞刷期比例的改變以及凋亡率的變化情況；電鏡觀察實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞核超微結(jié)構(gòu)變化；DNA-Ladder測(cè)定OPG對(duì)GCT單核基質(zhì)細(xì)胞DNA影響。 研究結(jié)果：用膠原酶-Ⅱ消化的方法可以獲得較高純度的Stc，細(xì)胞的基本性質(zhì)測(cè)定符合GCT主細(xì)胞性質(zhì)：MTT法結(jié)果示：OPG濃度在100μmol/L范圍內(nèi)，隨著

3、OPG劑量的增加(0.1、0.01、1、10、100 μmol/L)，細(xì)胞的吸光度減小，OPG濃度為10μmol/L時(shí)，不同作用時(shí)間(12、24、48、72h)，細(xì)胞的吸光度不同，48h組最小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；流式細(xì)胞儀結(jié)果示：OPG以不同濃度(1、10、100μmol/L)分別作用48h后，細(xì)胞凋亡率及增殖指數(shù)(proliferation index，PI)分別與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)：電鏡觀察到