瘢痕疙瘩中多配體蛋白聚糖-2表達的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討多配體蛋白聚糖-2(Syndecan-2簡稱SDC-2)因子在瘢痕疙瘩形成中的可能作用,為利用SDC-2及其相關(guān)因子預防和治療瘢痕疙瘩提供正確的理論和實驗依據(jù)。 方法: 本實驗所收集的標本全部取自安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院整形外科2006-2007年的手術(shù)患者。 l.免疫組化對照研究共30例,包括瘢痕疙瘩15例,對照正常皮膚15例。所取標本患者均無垂體腎上腺疾病、傳染病、皮膚病及免疫性疾病,局部無感染、潰

2、瘍,術(shù)前未應用激素及免疫抑制劑治療,局部亦未行放射治療。 2.取下標本立即置入10%中性甲醛液固定。經(jīng)脫水、石蠟包埋、切片,采用Elivision兩步法對標本進行免疫組化染色,在400倍光鏡下觀察切片中SDC-2的表達和分布情況,PBS替代做陰性對照,每張切片選取6個高倍視野。陽性率比較采用x2檢驗,以明確SDC-2在上述兩種不同組織間是否存在差異表達(檢驗水準取0.05)。 3.在2006年的手術(shù)病人中選擇瘢痕疙瘩和正

3、常皮膚標本各6例。 4.按文獻方法進行真皮成纖維細胞原代培養(yǎng),待細胞融合后傳代。 5.經(jīng)過5~6代細胞生長,待培養(yǎng)細胞量占培養(yǎng)瓶底面80%左右時換液。48小時后將細胞消化、離心,抽提RNA并反轉(zhuǎn)錄cDNA,行實時熒光定量PCR檢測。 6.重復3次后,得到的結(jié)果進行統(tǒng)計學分析,以明確上述兩種組織來源的成纖維細胞中SDC-2基因是否存在差異表達(檢驗水準取0.05)。 結(jié)果: 1.正常皮膚、瘢痕疙瘩組

4、織中SDC-2表達的免疫組化比較在400倍光鏡下觀察, SDC-2因子在兩種組織的表皮及真皮中均有陽性表達,為黃或棕黃色顆粒,呈局灶性或彌漫性分布,主要定位于上皮細胞基底層和細胞間間隙,在毛囊上皮細胞和血管內(nèi)皮細胞也可見陽性染色。在大部分瘢痕疙瘩中呈陽性至強陽性表達。統(tǒng)計學分析表明,SDC-2在瘢痕疙瘩中陽性率為86.67%,在正常皮膚為40.00%。SDC-2在瘢痕疙瘩中的表達陽性率高于正常皮膚,有顯著的統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

5、 2.正常皮膚、瘢痕疙瘩來源的成纖維細胞中SDC-2轉(zhuǎn)錄表達的比較將瘢痕疙瘩和正常皮膚來源的成纖維細胞中SDC-2基因轉(zhuǎn)錄表達水平作為配對資料,兩樣本均數(shù)用t檢驗分析,經(jīng)統(tǒng)計學分析實驗結(jié)果表明:瘢痕疙瘩來源的成纖維細胞中SDC-2基因轉(zhuǎn)錄表達水平遠大于正常皮膚來源的成纖維細胞中SDC-2基因的表達水平(P<0.05)。 結(jié)論:SDC-2是瘢痕疙瘩形成過程中的重要促進因子,其高表達和瘢痕疙瘩、腫瘤等相關(guān)疾病的形成有密切聯(lián)系,

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