1、目的： 目前對于類風濕關(guān)節(jié)炎的治療主要是通過藥物之間的聯(lián)合運用控制疾病的發(fā)展。而隨著研究的深入，通過神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)及基因工程的方法控制炎癥的發(fā)展也在研究中。本研究通過對后兩者治療類風濕關(guān)節(jié)炎的可行性探討，期望達到如下目的 1.以膠原誘導關(guān)節(jié)炎(CIA)大鼠為對象觀察不同足爪關(guān)節(jié)的破壞特點，為深入了解該模型發(fā)展的病理過程提供有益的實驗基礎(chǔ)。 2.基于目前膽堿能抗炎新理論設(shè)計迷走神經(jīng)懸吊刺激術(shù)，探討不同觀察時間段內(nèi)迷走

2、神經(jīng)懸吊對類風濕關(guān)節(jié)炎動物模型-膠原誘導關(guān)節(jié)炎大鼠發(fā)病的影響。 3.通過結(jié)合EGFP-IL-1Ra質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)染細胞系，探討新型膽固醇衍生物陽離子脂質(zhì)體作為基因工程載體和應用該載體攜帶基因治療膠原誘導關(guān)節(jié)炎大鼠的可行性。 方法： 1.牛Ⅱ型膠原和福氏不全佐劑聯(lián)合誘導制作大鼠關(guān)節(jié)炎模型，二次注射后連續(xù)時間段內(nèi)分別進行后足體積測量、關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分、放射學指數(shù)評估。8個月后處死動物，進行組織學觀察。對模型動物不同足部關(guān)節(jié)

3、的組織學破壞及破骨細胞分布特點進行評估。 2.聯(lián)合誘導制作關(guān)節(jié)炎大鼠模型30只，二次免疫后10天行迷走神經(jīng)懸吊術(shù)(手術(shù)組)，假手術(shù)組行單純迷走神經(jīng)分離，對照組不行任何操作。3組動物在二次免疫后3個月內(nèi)定期進行后足體積測量、關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分、放射學指數(shù)評估及炎癥相關(guān)因子檢測。3月后處死動物，進行組織學觀察，對各組動物足爪破壞的組織學指數(shù)及破骨細胞分布進行評估。 3.如上所述聯(lián)合誘導制作關(guān)節(jié)炎大鼠模型30只，在二次免疫后8個月

4、內(nèi)進行后足體積測量、關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分、放射學指數(shù)評估及炎癥相關(guān)因子檢測。8個月后處死動物，進行組織學觀察對各組動物足爪破壞的組織學指數(shù)及破骨細胞分布進行評估。 4.將膽固醇衍生物脂質(zhì)體與EGFP-IL-1Ra質(zhì)粒按照不同比例進行凝膠阻滯實驗，探討其體外最佳結(jié)合比例。參照此比例轉(zhuǎn)染HELA細胞，48小時后通過熒光顯微鏡觀察其轉(zhuǎn)染效果，MTT法檢測其細胞毒性。 結(jié)果： 1.隨著CIA大鼠疾病的發(fā)展，足爪關(guān)節(jié)炎指數(shù)逐漸增

5、長(與對照組有顯著性差異)，二次免疫后35天達高峰。相應的各足爪關(guān)節(jié)的放射學指數(shù)持續(xù)增高。而且發(fā)現(xiàn)足中部跗骨間關(guān)節(jié)最早受累，破壞最嚴重。組織學觀察顯示足部不同關(guān)節(jié)有不同的破壞特點。每種足部關(guān)節(jié)以一種損傷模式為主，多種模式可以并存。 2.在3個月的觀察時間內(nèi)手術(shù)組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)、放射學指數(shù)、組織學指數(shù)、血中炎癥因子的水平均低于對照組。假手術(shù)組在早期有一定的療效，隨著時間的發(fā)展其作用逐漸消失。將觀察時間延長到8個月時發(fā)現(xiàn)迷走神經(jīng)懸吊

6、術(shù)的炎癥抑制作用消失，最終3組動物炎癥相關(guān)指數(shù)、放射學指數(shù)、組織學指數(shù)、血中炎癥因子之間的評估沒有差異。 3.新型膽固醇衍生物陽離子脂質(zhì)體復合物與EGFP-IL-1Ra質(zhì)粒在質(zhì)量比為50:1時達到體外最有效結(jié)合。熒光顯微鏡下觀察結(jié)果表明，此脂質(zhì)體復合物攜帶IL-1Ra質(zhì)粒比單純質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞效率更高，而且細胞毒性小。 結(jié)論： 1.在CIA大鼠模型疾病發(fā)展的過程中每個足爪關(guān)節(jié)都具有特定的破壞模式，多種模式可以共同存于