1、目的:
　　為了探索長鏈非編碼RNA HOX轉(zhuǎn)錄反義RNA(HOTAIRmRNA)與腎透明細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系,我們檢測了非編碼 RNA HOTAIR在腎透明細(xì)胞癌組織與癌旁正常腎組織間的表達(dá)差異,并進(jìn)一步探討其與腎透明細(xì)胞癌各臨床分期、病理分級之間的關(guān)系。通過構(gòu)建shRNA載體,研究干涉沉默非編碼RNA HOTAIR對腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞786-0的生長、凋亡、侵襲遷移等生物學(xué)行為的影響,為腎癌的診斷和治療提供新的方法和思路。

2、r>　　方法:
　　收集2013年08月至2014年04月間在南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科行后腹腔鏡腎癌根治性切除術(shù)治療并術(shù)后病理確診為腎透明細(xì)胞癌的20例腎癌組織和相應(yīng)的癌旁正常腎臟組織(術(shù)前未放療或化療)。選用TRIZOL法提取腎透明細(xì)胞癌組織、配對癌旁正常腎組織的總RNA,定量后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測腎透明細(xì)胞癌和配對癌旁正常腎組織中HOTAIR的表達(dá)情況,并結(jié)合臨床分期和病理分級,進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。采用基

3、因功能喪失的方法,構(gòu)建shRNA載體,研究沉默非編碼RNA HOTAIR對腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞786-0生長的影響:CCK-8檢測細(xì)胞的增殖,transwell實驗檢測細(xì)胞侵襲,Annexin V/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果:
　　1、腎透明細(xì)胞癌中HOTAIR的相對表達(dá)量為12.36±1.61,配對癌旁正常腎組織中的表達(dá)量為3.01±0.45,非編碼RNA HOTAIR在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)明顯高于配對癌旁正常腎組

4、織(P<0.05)。
　　2、腎透明細(xì)胞癌非編碼 RNA HOTAIR的表達(dá)水平從高分化組到低分化組和臨床I期到臨床III期均明顯升高,,各組之間存在顯著差異(P<0.05),提示HOTAIR在腎透明細(xì)胞癌中的高表達(dá)與腫瘤趨向于惡性有關(guān)。非編碼 RNA HOTAIR的表達(dá)水平在年齡、性別無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　3、干涉沉默非編碼RNA HOTAIR后,腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞786-0的細(xì)胞增殖明顯降低,細(xì)胞侵襲能力明顯

5、下降,細(xì)胞凋亡明顯增加。
　　結(jié)論:
　　1、在腎透明細(xì)胞癌組織中, HOTAIR的表達(dá)顯著上調(diào),提示非編碼RNA HOTAIR可能與腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān),HOTAIR的表達(dá)水平檢測可能有助于腎透明細(xì)胞癌的診斷。
　　2、HOTAIR的表達(dá)水平與腎透明細(xì)胞癌的臨床分期呈正相關(guān),或許可以作為診斷腎透明細(xì)胞癌或判斷腎透明細(xì)胞癌患者預(yù)后的新指標(biāo)。
　　3、通過體外細(xì)胞實驗發(fā)現(xiàn)干涉沉默腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞786-0非