阻斷JAK2-STAT3信號轉導通路對大鼠急性脊髓損傷中細胞凋亡的調控作用的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分:專用大鼠脊髓損傷模型的建立及穩(wěn)定性測定
  目的:設計制造一種簡易、穩(wěn)定的Allen’s大鼠脊髓打擊器,并評估其制作大鼠脊髓損傷模型的參數和穩(wěn)定性,為脊髓損傷的研究提供基礎。
  方法:分為篩選打擊沖量和穩(wěn)定性評估兩個實驗步驟。取體重220g-250g的雄性SD大鼠48只,步驟一取大鼠30只,每6只一組用重物墜落打擊方法,分別用撞針(7g)從0cm、3cm、6cm、9cm、12cm高度進行打擊,0cm組為對照組,僅

2、打開椎板。打擊后通過行為學評分和病理切片HE染色確定出能夠造成較明顯脊髓不完全損傷的高度(6cm組和9cm組);步驟二取18只大鼠(對照組、6cm組、9cm組各6只)以與步驟一相同的方法造模,后將步驟一與步驟二中對照組、6cm組和9cm組共36只的數據匯總進行穩(wěn)定性及效果評估。
  結果:打擊后24hBBB評分對照組大鼠與手術前正常大鼠相同,HE染色見對照組脊髓無可見損傷。脊髓損傷各打擊沖量組(沖量=高度×主動撞針質量)術后BBB

3、評分相對于術前有不同程度降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),HE染色可見灰、白質組織結構不完整,損傷區(qū)可見壞死灶、細胞腫脹及紅細胞聚集。大鼠脊髓最大受損面積比在6cm高度(42g.cm沖量)組和9cm高度(63g.cm沖量)組組內差異較?。–V<10%)、組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),脊髓最大受損面積比與BBB評分呈負相關關系(r=-0.851,p=0.000)。
  結論:本研究研制的大鼠脊髓打擊器可成功建立不同損傷

4、程度的穩(wěn)定性高、重復性好的大鼠急性脊髓挫傷模型,可為后續(xù)大鼠脊髓損傷的研究提供有效的支持。
  目的:1、運用HE染色和TUNEL凋亡檢測方法,探討大鼠脊髓損傷后發(fā)生凋亡的細胞的數量,及應用不同劑量JAK2/STAT3信號傳導通路阻斷劑AG490對脊髓形態(tài)和凋亡細胞的數量的影響。
  2、運用westernblot實驗方法,檢測不同劑量的AG490對P-STAT3(磷酸化信號轉導和轉錄激活因子3)和P-JAK2(磷酸化蛋白酪

5、氨酸激酶2)的表達數量的影響。
  3、探討不同程度的阻斷JAK2/STAT3信號傳導通路對于大鼠急性脊髓損傷(acute spinal cord injury,ASCI)的細胞凋亡的影響及其相關性。
  方法:采用健康成年雄性SD大鼠60只。體重220-250g,分為假手術對照組(E組,n=12),脊髓損傷組(A組,n=12),脊髓損傷+AG490干預組:5mg/kg體重組(B組,n=12)、10mg/kg體重組(C組,n

6、=12)和15mg/kg體重組(D組,n=12)五組。應用基于 ALLEN’S重物墜落法研發(fā)的“專用大鼠脊髓打擊器”制作大鼠急性脊髓損傷模型,假手術組僅切除等大的椎板不損傷脊髓。術前及術后24h記錄BBB評分,術后24h將大鼠處死,每組取6只做石蠟包塊進行HE染色和TUNEL凋亡檢測,另6只取新鮮組織進行westernblot實驗檢測P-JAK2和P-STAT3的表達變化。繪制P-JAK2,P-STAT3含量與凋亡數目相關關系圖。

7、>  結果:成功建立穩(wěn)定的ASCI模型并獲得滿意的脊髓組織標本。HE染色顯示脊髓組織損傷程度在各組間無明顯差異(P>0.05);TUNEL檢測顯示對照組凋亡細胞很少,損傷組凋亡細胞最多,AG490干預的損傷組凋亡細胞數隨 AG490劑量增大而減少;westernblot檢測顯示A、B、C、D四組中P-JAK2和P-STAT3含量隨AG490劑量增大而降低,各組間存在明顯差異(p<0.05),組內數據差異較小(P>0.05),無統(tǒng)計學意義

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