1、目的：1.觀察在脂多糖激活原代培養(yǎng)大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞模型中，TNFα和HMGB1蛋白表達(dá)及TNFα mRNA和HMGB1mRNA表達(dá)的時(shí)間依賴性。2.觀察NF-κ抑制劑吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)和p38MAPK抑制劑SB203580對(duì)體外TNFα誘導(dǎo)的原代培養(yǎng)大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞HMGB1蛋白表達(dá)及mRNA的影響。3.觀察鞘內(nèi)注射Etanercept對(duì)坐骨神經(jīng)慢性擠壓傷(CCI)大鼠痛閾和脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活性、NF-κBp-p65、P-p38M

2、APK、HMGB1表達(dá)的調(diào)節(jié)，并探討其臨床疼痛治療的機(jī)制。
　　 方法：1.用脂多糖(100ng/ml)刺激原代培養(yǎng)大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞，根據(jù)不同的指標(biāo)設(shè)定取樣時(shí)間點(diǎn)(0h，2h，4h，6h，8h，12h，16h，18h，24h)，用ELISA法檢測(cè)相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNFα和HMGB1表達(dá)情況，用Western Blot檢測(cè)細(xì)胞裂解液HMGB1表達(dá)情況，用RT-PCR檢測(cè)TNFα mRNA和HMGB1 mRNA的表達(dá)。2.采用

3、原代培養(yǎng)大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞，設(shè)立兩部分，分別用PDTC和SB203580處理。第一部分設(shè)立對(duì)照組、TNFα(25ng/ml)組、TNFα+PDTC組、PDTC組，第二部分設(shè)立對(duì)照組、TNFα組、TNFα+SB203580組、SB203580組，均孵育16h后分別用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中HMGB1表達(dá)情況、Western blot檢測(cè)細(xì)胞HMGB1、NF-κBp-p65和P-p38MAPK表達(dá)情況，用RT-PCR檢測(cè)HMGB1 mRN

4、A表達(dá)。3.252只成年雄性SD大鼠，體質(zhì)量250～300g，鞘內(nèi)置管成功后，隨機(jī)分為7組(n=36)：正常對(duì)照組：實(shí)驗(yàn)大鼠不做任何處置；假手術(shù)組：僅暴露左側(cè)坐骨神經(jīng)不結(jié)扎；假手術(shù)+Etanercept組：假手術(shù)處理大鼠并經(jīng)鞘內(nèi)置管注入Etanercept組；CCI組：大鼠CCI手術(shù)處理；CCI+Etanercept組。鞘內(nèi)置管3 d后按每組處理不同，開(kāi)始鞘內(nèi)輸注生理鹽水和Etanercept，每2d鞘內(nèi)給藥一次，鞘內(nèi)注射2 d后分別建

5、立大鼠CCI神經(jīng)病理性疼痛模型和假手術(shù)模型，測(cè)定大鼠的痛敏值，并在CCI后第3，7，13天處死大鼠，取脊髓腰膨大部進(jìn)行免疫組化測(cè)定OX42表達(dá)、用Western Blot檢測(cè)HMGB1、NF-κBp-p65和p-p38MAPK表達(dá)情況，用RT-PCR檢測(cè)HMGB1 mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果：1.LPS刺激后大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)呈巨噬細(xì)胞樣變化；TNFα的分泌于8h達(dá)峰值，細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞外HMGB1的分泌分別于18h和24h達(dá)峰值，

6、TNFα mRNA的表達(dá)于2h即達(dá)峰值，HMGB1mRNA自8h開(kāi)始增加，12h達(dá)峰值。2.TNFα刺激后大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞裂解液及上清液中均有HMGB1蛋白表達(dá)增高，PDTC可抑制TNFα誘導(dǎo)的NF-κBp-p65核表達(dá)，并下調(diào)HMGB1蛋白和HMGB1mRNA的表達(dá)；SB203580可抑制TNFα誘導(dǎo)的p-p38MAPK表達(dá)(P<0.01)，同樣下調(diào)HMGB1蛋白和HMGB1mRN的表達(dá)。3.CCI組與Sham組比較大鼠術(shù)后各時(shí)點(diǎn)痛敏閾

7、值明顯下降，并在術(shù)后第3d降至最低點(diǎn)(P<0.01)，脊髓OX42、p-p65、p-p38MAPK的表達(dá)明顯升高(P<0.01)，HMGB1mRNA的表達(dá)從3d開(kāi)始表達(dá)上調(diào)，7d達(dá)峰值，HMGB1蛋白表達(dá)于7d開(kāi)始增加，持續(xù)增長(zhǎng)至13d。Etanercept+CCI組與CCI組比較，術(shù)后各時(shí)點(diǎn)大鼠痛敏閾值增高，脊髓OX42、p-p65、p-p38MAPK、HMGB1的表達(dá)下降(P<0.01)。
　　 結(jié)論：1.LPS可激活小膠質(zhì)