1、溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題El：墨i墜王遢△墾魚二!基國(guó)麥鯊盟韭叢二細(xì)胞照疸細(xì)胞塑殖)遇圭塑堡蕉的髭喧答辯委員會(huì)主席；邀鑫友答辯委員會(huì)成員：～魚浙生周丞到堡主塾囂趕論文答辯日期；呈Q!墨生!=!=旦坌晝旦溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要墨i趔△至迥塹魚二!基國(guó)壹達(dá)懟韭叢!細(xì)胞韙疸細(xì)胞增殖!燙圭塑堡耋的量墮第一部分：AEG一1SiRNA干擾序列的篩選及效果驗(yàn)證目的：設(shè)計(jì)合成針對(duì)人AEG—l基因的三對(duì)siRNA序列，驗(yàn)證并從中篩選出對(duì)非

2、小細(xì)胞肺癌細(xì)胞基因沉默效果最優(yōu)的序列。方法：(1)根據(jù)RNA干擾原理，針對(duì)人AE6—1基因設(shè)計(jì)并化學(xué)合成三對(duì)AEGIsiRNA序列、一對(duì)陰性序列和一對(duì)帶熒光標(biāo)記的陰性序列(FAMsiRNA)。(2)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑lipofetamin2000介導(dǎo)標(biāo)記的陰性對(duì)照序列(F斛siRNA)轉(zhuǎn)染非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，轉(zhuǎn)染6小時(shí)后，通過熒光顯微鏡和流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染效率，進(jìn)行轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化。(3)篩選實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組、轉(zhuǎn)染試劑對(duì)照組(MOCK

3、組)、陰性對(duì)照組以及三個(gè)siRNA干擾實(shí)驗(yàn)組，轉(zhuǎn)染48小時(shí)后。通過熒光定量PCR和Westernblot分別觀察轉(zhuǎn)染前后非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞中AEGImRNA和相應(yīng)蛋白表達(dá)的下調(diào)情況。從中選出一對(duì)最有效的AEGIsiRNA序列。結(jié)果：熒光定量PCR檢測(cè)mRNA及Westernblot檢測(cè)蛋白表達(dá)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，三對(duì)siENA均能顯著下調(diào)非小細(xì)肺癌細(xì)胞細(xì)胞AEGI基因的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平，其mRNA表達(dá)抑制率分別為6

4、98％、696％和414％。三個(gè)序列中AEGIsiRNAI的沉默效果最優(yōu)。結(jié)論：成功設(shè)計(jì)和合成了針對(duì)AEGI基因的小干擾RNA序列，且AEG—lsiRNAI轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，其mRNA和蛋白表達(dá)抑制效果較優(yōu)，為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：AEG一1；siRNA；非小細(xì)胞肺癌；RNA干擾第二部分：AEGI表達(dá)下調(diào)對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲的影響目的：采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法介導(dǎo)siRNA靶向沉默非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞AEGI基因表達(dá)，探討其對(duì)細(xì)胞增