1、機(jī)體在嚴(yán)重創(chuàng)傷后，下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸(Hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA)的激活通過分泌糖皮質(zhì)激素對(duì)免疫、炎癥反應(yīng)以及代謝的調(diào)節(jié)，對(duì)機(jī)體起著保護(hù)性作用。然而，過度而持久的HPA軸活化則可能會(huì)引起嚴(yán)重的繼發(fā)性傷害。多篇文獻(xiàn)報(bào)道了嚴(yán)重?zé)齻?、?chuàng)傷及重癥患者糖皮質(zhì)激素持續(xù)性增高，并且與患者的預(yù)后密切相關(guān)。因此，如何防止HPA軸過度激活所導(dǎo)致的繼發(fā)性傷害就成為了臨床上治療嚴(yán)重創(chuàng)傷所需要解決的關(guān)鍵問題。

2、r>　　 谷氨酸及其離子型NMDA受體(N-methyl-D-aspartic acid，NMDA)參與了多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)生理和病理活動(dòng)如突觸可塑性，學(xué)習(xí)記憶，腦缺血，癲癇等。研究表明谷氨酸離子型NMDA受體尤其是NR2B亞基高度表達(dá)于下丘腦室旁核(Paraventricular nucleus，PVN)及視上核神經(jīng)元中。隨著研究的深入，NR2B亞基對(duì)NMDA受體功能發(fā)揮及其在下丘腦PVN神經(jīng)元興奮性調(diào)節(jié)中的作用引起了學(xué)者的廣泛關(guān)注。

3、
　　 同時(shí)，在嚴(yán)重創(chuàng)傷后下丘腦室旁核神經(jīng)元釋放的促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(Corticotropin-releasing Hormone，CRH)及其受體的表達(dá)也明顯增高，在HPA軸活性調(diào)節(jié)及血液中糖皮質(zhì)激素的升高中發(fā)揮著十分重要的作用。此外有研究發(fā)現(xiàn)，急性應(yīng)激反應(yīng)能夠引起PVN神經(jīng)元NMDA受體亞基的表達(dá)發(fā)生變化，并且CRH可能對(duì)這一變化有著重要作用。但是，目前對(duì)于嚴(yán)重創(chuàng)傷后下丘腦NMDA受體亞基表達(dá)的變化及其在HPA軸活化

4、狀態(tài)變化中的作用，以及作為應(yīng)激反應(yīng)中關(guān)鍵激素的CRH是否參與了嚴(yán)重創(chuàng)傷后NMDA受體亞基表達(dá)的調(diào)控，尚不十分清楚。
　　 現(xiàn)用的創(chuàng)傷模型主要包括槍彈傷，爆炸傷，撞擊傷及燙傷，因槍彈傷，爆炸傷，撞擊傷對(duì)致傷條件及參數(shù)難以精確控制，所得到的動(dòng)物模型在損傷程度，損傷部位等不統(tǒng)一，不利于創(chuàng)傷后應(yīng)激反應(yīng)的研究。故本實(shí)驗(yàn)采取國(guó)際上常用的致傷部位及程度易控制的30%體表面積背腹部皮膚Ⅲ度燙傷模型為嚴(yán)重創(chuàng)傷模型。利用放射免疫法測(cè)定血清中皮質(zhì)醇濃

5、度，反應(yīng)嚴(yán)重燙傷后大鼠HPA軸活性變化，并采用免疫組織化學(xué)及western印跡方法觀察大鼠下丘腦組織NMDA受體NR1，NR2B亞基表達(dá)變化。此外，為了進(jìn)一步證實(shí)CRH對(duì)嚴(yán)重燙傷后大鼠下丘腦NMDA受體NR1，NR2B表達(dá)的調(diào)控作用，采取大鼠側(cè)腦室內(nèi)置管注射的方法，觀察不同濃度的CRH及其拮抗劑CP154，526對(duì)大鼠NR2B亞基表達(dá)水平的影響，分別運(yùn)用了RT-PCR及免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)了NMDA受體NR1及NR2B的RNA及蛋白表達(dá)

6、水平。
　　 主要結(jié)果及結(jié)論如下：
　　 1.嚴(yán)重燙傷后大鼠血清皮質(zhì)醇濃度升高，在燙傷后6h時(shí)最明顯，傷后48h仍然維持在較高的濃度，而這一作用可以被CRH受體1拮抗劑CP154，526和NMDA受體拮抗劑MK-801部分拮抗。在注射CP154，526和MK-801組血清皮質(zhì)醇濃度較6h時(shí)明顯下降。血清皮質(zhì)醇濃度升高反應(yīng)在側(cè)腦室注射CRH時(shí)也同樣出現(xiàn)。與正常生理鹽水組大鼠血清皮質(zhì)醇濃度44.5±4.6 ng/ml相比較，

7、側(cè)腦室注射注射CRH后血清皮質(zhì)醇的含量明顯增加199.5±18.4 ng/ml，并且隨著CRH濃度增高而升高，而CP-154，526能夠拮抗這一反應(yīng)所拮抗。這就說明CRH與NMDA受體信號(hào)通路可能在嚴(yán)重燙傷后HPA軸興奮持續(xù)性增高中發(fā)揮著重要的作用。
　　 2.下丘腦免疫組織化學(xué)染色及western-bloting檢測(cè)結(jié)果顯示：NR1亞基在嚴(yán)重?zé)齻蟊磉_(dá)增加，尤其以24小時(shí)最為明顯，一直持續(xù)到48h。而在注射CP154，526組

8、卻沒有明顯的增加。NR2B的表達(dá)出現(xiàn)了與NR1相反的結(jié)果，在6小時(shí)顯著減少，而后出現(xiàn)表達(dá)增加。同時(shí)，與傷后6h相比較注射CP154，526組NR2B的表達(dá)量增加。這就說明嚴(yán)重燙傷后CRH的表達(dá)增加可能引起NR2B表達(dá)減少，而這一作用可以被CP154，526所逆轉(zhuǎn)，進(jìn)而說明CRH對(duì)NR2B的下調(diào)可能是HPA軸興奮性升高的機(jī)制之一。
　　 3.通過RT-PCR方法檢測(cè)了各組側(cè)腦室注藥后下丘腦NR2B的表達(dá)情況。與注射生理鹽水組，注射

9、CP154，526組及CRH+CP154，526組下丘腦NR2B的表達(dá)沒有明顯的變化，但在低濃度及高濃度CRH組卻明顯下降，且有隨著CRH濃度升高而降低的趨勢(shì)。同時(shí)，為了進(jìn)一步闡明CRH對(duì)下丘腦NR1表達(dá)的影響，本實(shí)驗(yàn)也對(duì)下丘腦NR1的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，與注射生理鹽水組相比較，注射CRH組NR1的表達(dá)沒有明顯的變化。進(jìn)一步的NR2B免疫組化染色結(jié)果也提示NR2B的表達(dá)隨著CRH的濃度升高而減少，說明NR2B受到CRH的調(diào)控。