1、殘胃癌是一種比較常見(jiàn)的惡性腫瘤，近年來(lái)發(fā)生率有逐漸升高的趨勢(shì)，其發(fā)生機(jī)制頗為復(fù)雜。研究表明，殘胃癌的發(fā)生、發(fā)展與許多基因的異常表達(dá)有關(guān)。β-catenin與MMP-7在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用日益受到關(guān)注，本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化S-P法來(lái)檢測(cè)32例殘胃癌及癌旁組織的β-catenin與MMP-7的表達(dá)況，皆在探討殘胃癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，對(duì)殘胃癌的早期發(fā)現(xiàn)，預(yù)后判定和治療進(jìn)一步奠定基礎(chǔ)。 方法： 一、實(shí)驗(yàn)材料

2、(一)病例標(biāo)本32例殘胃癌標(biāo)本均取自1998年10月-2006年6月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤外科手術(shù)病人，首次手術(shù)原因均為胃良性病變?；颊吣挲g40-80歲(平均60.25歲)，其中男性26例，女性6例。所有標(biāo)本經(jīng)4％甲醛固定，石蠟包埋。5 μm厚連續(xù)切片，分別行蘇木素-伊紅及免疫組化染色。全部病例按UICC新TNM分期、日本胃癌處理規(guī)約及中國(guó)醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所胃癌外科分型進(jìn)行分期分型，以上病例均經(jīng)病理證實(shí)。 (二)實(shí)驗(yàn)用品1

3、、主要試劑β-catenin即用型單克隆抗體、MMP-7濃縮型單克隆抗體、S-P試劑盒、DAB顯色劑、0.01mmolPBS溶液、3％雙氧水、檸檬酸緩沖液。 2、主要儀器 切片機(jī)，顯微鏡，保濕盒，冰箱，高壓鍋，PH試紙。 二、實(shí)驗(yàn)方法 (一)組織切片染色：采用免疫組化S-P法對(duì)切片分別進(jìn)行β-catenin即用型單克隆抗體、MMP-7濃縮型單克隆抗體染色，其中MMP-7濃縮型單克隆抗體稀釋倍數(shù)為1：300

4、，具體步驟按試劑盒說(shuō)明書逐步操作。 (二)結(jié)果判定：β-catenin按照J(rèn)awhari等的方法，染色分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為：0分，細(xì)胞膜表達(dá)減少或基本消失；1分，細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核表達(dá)；2分，異質(zhì)性表達(dá)減弱；3分，保留細(xì)胞膜的表達(dá)。0～2分為異常表達(dá)，3分為正常表達(dá)。MMP-7根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞染色程度及著色細(xì)胞百分率進(jìn)行記分：0分，基本不著色；1分，著色淡；2分，著色深。著色細(xì)胞占全部記數(shù)細(xì)胞百分率<5％為0分；5％～25％為1分；26％～50％

5、為2分；>50％為3分。兩種分值相乘≤1分為陰性，2～4分為陽(yáng)性。 (三)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，應(yīng)用Fisher精確概率法分析β-catenin與MMP-7的表達(dá)與臨床病理的關(guān)系。應(yīng)用speraman相關(guān)分析β-caten-in與。MMP-7的相互關(guān)系，P<0.05為有顯著差異。 結(jié)果： 一、β-caten i n、MMP-7與殘胃癌組織中的表達(dá)情況在32例癌旁組織中4例(1

6、2.5％)細(xì)胞膜β-catenin異常表達(dá)，而殘胃癌組織中則19例細(xì)胞膜(59.4％)異常表達(dá)，殘胃癌組織β-catenin表達(dá)的陽(yáng)性率高于癌旁組織(P<0.01)；在32例癌旁組織中無(wú)MMP-7陽(yáng)性表達(dá)，而殘胃癌組織中則18例(56.3％)陽(yáng)性表達(dá)，殘胃癌組織MMP-7表達(dá)的陽(yáng)性率高于癌旁組織(P<0.01)。 二、β-catenin和MMP-7與殘胃癌臨床病理之間的關(guān)系β-catenin的異常表達(dá)與腫瘤大小、大體分型、浸潤(rùn)深

7、度和生長(zhǎng)方式均顯著相關(guān)(P<0.05)，而與年齡、性別、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。MMP-7異常表達(dá)與浸潤(rùn)深度、生長(zhǎng)方式和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均顯著相關(guān)(P<0.05)，與年齡、性別、腫瘤大小、大體分型、分化程度因素?zé)o關(guān)。 三、β-catenin和MMP-7在殘胃癌中表達(dá)的相互關(guān)系經(jīng)speraman相關(guān)分析表明殘胃癌組織中β-catenin和MMP-2表達(dá)具有顯著相關(guān)性(r<,s>=0.55，P<0.05)。 結(jié)論： 1、