1、類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種以侵襲性關節(jié)炎為主要表現的全身性自身免疫病。本病以女性多發(fā)，男女患病比例約1∶3。RA可發(fā)生于任何年齡，以30-50歲為發(fā)病的高峰。我國大陸地區(qū)的RA患病率為0.2-0.4％。由于本病的病因及發(fā)病機制未完全明確，目前臨床上尚缺乏根治及預防本病的有效措施。RA治療的目的在于減輕關節(jié)癥狀、緩解病情進展、防止和減少關節(jié)的破壞、保護關節(jié)功能、最大限度提高患者的生活質量。應強調早

2、期診斷、早期治療、聯合用藥和個體化治療的原則。治療方法包括一般治療、藥物治療、外科手術治療，其中以藥物治療最為重要。T-614，是一種新型免疫調節(jié)劑，能夠抑制炎癥因子的產生，減輕關節(jié)炎癥及關節(jié)損傷。目前，對T-614炎癥抑制作用的研究主要停留在動物模型水平，而對RA患者離體滑膜細胞的炎癥抑制作用的研究尚缺乏直接證據。
　　第一部分篩選患者入組及采集標本
　　目的:篩選活動性類風濕關節(jié)炎患者入組及采集滑膜標本
　　方法:

3、
　　1.篩選患者入組:
　　A.納入病例標準
　　(1)診斷符合2010年ACR/EULAR分類標準
　　(2)年齡≥18歲
　　B.排除病例標準
　　(1)不符合以上診斷標準者
　　(2)妊娠或準備懷孕的女性，或哺乳期女性
　　(3)嚴重的心、肝、腎功能異常（超過正常值上限的1.5倍）
　　(4)有酗酒史者
　　(5)有惡性腫瘤者
　　(6)對T-614有過敏史的患者

4、
　　(7)參加任何臨床藥物試驗的患者
　　2.采集標本:采集符合上述標準并行滑膜切除術治療的患者的滑膜組織。
　　結果:
　　1.選取5例符合標準的患者入組。
　　2.采集上述患者病變部位滑膜組織。
　　結論:成功篩選了活動性類風濕關節(jié)炎患者入組及獲取了RA患者病變部位滑膜組織。
　　第二部分離體滑膜細胞培養(yǎng)及鑒定
　　目的:研究類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞體外培養(yǎng)方法及鑒定方法

5、　　方法:
　　1.用Ⅰ型膠原酶體外培養(yǎng)法，對5例類風濕關節(jié)炎患者滑膜細胞組織標本進行原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)的成纖維細胞形態(tài)及細胞增殖情況。
　　2.原代細胞傳代培養(yǎng)至3-4代時，應用細胞免疫組織化學染色方法，檢測Vimentin及CD68表達水平，鑒定滑膜細胞類型。
　　結果:
　　1.成功培養(yǎng)了5例RA患者滑膜細胞。
　　2.成纖維樣滑膜細胞表現為Vimentin染色陽性，CD68染色陰性。

6、>　　結論:成功獲得了RA患者成纖維樣滑膜細胞。
　　第三部分 T-614抑制TNF-a產生
　　目的:研究T-614對TNF-a的作用
　　方法:
　　1.將細胞分為4組，分別為:對照組、MTX組、T-614組和兩藥聯用組。應用蛋白免疫印跡法(western blot)檢測4組細胞內TNF-a蛋白表達水平。
　　2.對上述4組，應用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測4組細胞外TNF-a分泌水平。