1、第一部分：慢性帕金森病MPTP猴模型的研究 目的：應(yīng)用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-吡啶(MPTP)，在健康恒河猴中誘發(fā)出穩(wěn)定的慢性帕金森病(PD)樣癥狀，模擬人類PD的演變過程。 方法：通過慢性皮下注射的方法，對(duì)4只雄性成年恒河猴進(jìn)行MPTP處理(0.1mg/kg1次/日)，采用PD猴模型修正評(píng)分量表(PPRS)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分。評(píng)分達(dá)到8分視為癥狀出現(xiàn)，至癥狀穩(wěn)定后停止使用MPTP。在模型制備過程中，以

2、一周為間隔連續(xù)進(jìn)行血紅蛋白、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、GOT、GPT、BUN、Cr、BS的檢測，評(píng)價(jià)模型的機(jī)能狀態(tài)。 結(jié)果：4只動(dòng)物均成功復(fù)制出雙側(cè)穩(wěn)定的PD樣癥狀，癥狀出現(xiàn)的時(shí)間為(18.3±1.3天)，最終達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)(26.3±1.3天)；經(jīng)過1月連續(xù)觀察，無行為學(xué)恢復(fù)現(xiàn)象出現(xiàn)；對(duì)左旋多巴治療有明顯的反應(yīng)。所有動(dòng)物除白細(xì)胞在模型制備過程中出現(xiàn)漸進(jìn)性升高，最后與正常比較出現(xiàn)顯著性差異(p＜0.01)，其余指標(biāo)均無明顯差異(p＞0.01

3、)。 結(jié)論：慢性MPTP猴模型能夠在行為學(xué)上良好模擬人類PD的特征性、慢性變化過程；在模型形成過程中動(dòng)物的機(jī)能狀態(tài)無明顯變化，可以作為研究模型應(yīng)用于PD的治療研究。 第二部分：帕金森病慢性猴模型自體頸動(dòng)脈體細(xì)胞團(tuán)塊紋狀體內(nèi)移植治療的療效評(píng)價(jià) 目的：評(píng)價(jià)MPTP慢性帕金森病猴模型自體頸動(dòng)脈體細(xì)胞團(tuán)塊紋狀體內(nèi)移植后的治療效果。 方法：4只按非人類靈長類帕金森病評(píng)分量表(PPRS)評(píng)價(jià)，行為學(xué)癥狀持續(xù)穩(wěn)定1月的

4、慢性PDMPTP猴模型，應(yīng)用MRI(GESigna1.5TNV/i)進(jìn)行移植術(shù)前定位，取一側(cè)的自體頸動(dòng)脈體細(xì)胞團(tuán)塊，使用Leksell立體導(dǎo)向系統(tǒng)(GM695)行紋狀體區(qū)立體定向移植術(shù)。按PPRS標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行移植后行為學(xué)評(píng)分，并采用阿樸嗎啡注射誘發(fā)旋轉(zhuǎn)的方法觀察治療效果；術(shù)后3月深度麻醉下取出雙側(cè)SN區(qū)域腦組織性酪氨酸羥化酶(Tyrosinehydroxylase，TH)組織化學(xué)研究；應(yīng)用高效液相色譜(HPLC)測定雙側(cè)SN、紋狀體區(qū)域腦組

5、織Glu、GABA、Asp、Gsy和多巴胺及代謝產(chǎn)物的變化。 結(jié)果：移植后動(dòng)物開始出現(xiàn)進(jìn)展性移植對(duì)側(cè)行為學(xué)改善，4周后行為學(xué)評(píng)分與移植前比較出現(xiàn)顯著性差異(p＜0.01)；阿樸嗎啡注射后動(dòng)物出現(xiàn)朝向移植側(cè)的旋轉(zhuǎn)行為。移植側(cè)黑質(zhì)TH陽性細(xì)胞數(shù)明顯增加，與對(duì)照側(cè)比較具有顯著性差異(p＜0.01)。移植側(cè)黑質(zhì)和紋狀體區(qū)域腦組織DA及其代謝產(chǎn)物水平明顯升高，與對(duì)照側(cè)比較差異具有極顯著性意義(p＜0.01)；Glu、GABA水平顯著下降，

6、差異具有極顯著性意義(p＜0.01)；Asp和Gsy雙側(cè)比較差異無顯著性意義(p＞0.05)。 結(jié)論：自體頸動(dòng)脈體細(xì)胞團(tuán)塊紋狀體內(nèi)移植能夠改善PD猴的行為學(xué)；增加移植區(qū)域細(xì)胞存活率；提高移植區(qū)域DA及其代謝產(chǎn)物水平，降低Glu和GABA含量，可能成為治療PD的一種有效方法。 第三部分:慢性帕金森病MPTP猴模型自體頸動(dòng)脈體細(xì)胞團(tuán)塊紋狀體移植術(shù)后1H-MRS研究 目的：應(yīng)用質(zhì)子磁共振波譜(1H-MRS)技術(shù)，進(jìn)行慢

7、性帕金森病(PD)1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)猴模型自體頸動(dòng)脈體(CB)細(xì)胞紋狀體區(qū)移植術(shù)后生化代謝物的檢測，評(píng)價(jià)細(xì)胞結(jié)構(gòu)生存能力。 方法：4只按非人類靈長類帕金森病評(píng)分量表(PPRS)評(píng)價(jià)，行為學(xué)癥狀持續(xù)穩(wěn)定1月的慢性PDMPTP雄性猴模型，應(yīng)用MRI(GESigna1.5TNV/i)進(jìn)行移植術(shù)前定位，取一側(cè)的自體CB，使用Leksell立體導(dǎo)向系統(tǒng)(Leksell，GM952)行紋狀體區(qū)立體定向移

8、植術(shù)。于移植術(shù)后8周內(nèi)按PPRS標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行移植后行為學(xué)評(píng)分；每2周對(duì)雙側(cè)紋狀體區(qū)行質(zhì)子磁共振波譜采集，觀察大腦主要代謝物氮-乙酰天冬氨酸(NAA)，膽堿化合物(Cho)，肌酸及磷酸肌酸(Cr)，采用隨機(jī)軟件FuncTool4.0對(duì)大腦代謝物含量進(jìn)行半定量化分析，觀察NAA/Cr和Cho/Cr的變化，以配對(duì)的t檢驗(yàn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并與行為學(xué)評(píng)分進(jìn)行對(duì)照分析。 結(jié)果：與未移植側(cè)紋狀體區(qū)比較，移植術(shù)4周后，移植側(cè)紋狀體區(qū)NAA/Cr逐漸增

9、高，Cho/Cr逐漸下降，移植術(shù)后6周自體雙側(cè)出現(xiàn)顯著性差異(p＜0.05)。 結(jié)論：1H-MRS顯示出慢性PDMPTP猴模型移植區(qū)域的代謝及生化改變，表明自體CB細(xì)胞移植可能產(chǎn)生局部多巴胺神經(jīng)元的生長，進(jìn)而可以作為有效手段應(yīng)用于PD的治療。 第四部分：帕金森病慢性MPTP猴模型自體頸動(dòng)脈體細(xì)胞團(tuán)塊紋狀體移植后抗氧化作用的研究 目的：進(jìn)行慢性帕金森病(PD)MPTP猴模型自體頸動(dòng)脈體細(xì)胞紋狀體移植后抗氧化作用的研

10、究，探討移植產(chǎn)生作用的機(jī)制。 方法：4只按非人類靈長類帕金森病評(píng)分量表(PPRS)評(píng)價(jià)，行為學(xué)癥狀持續(xù)穩(wěn)定1月的慢性PDMPTP猴模型，應(yīng)用MRI(GESigna1.5TNV/i)進(jìn)行移植術(shù)前定位，取一側(cè)的自體頸動(dòng)脈體細(xì)胞團(tuán)塊，使用Leksell立體導(dǎo)向系統(tǒng)(Leksell，GM695)行紋狀體區(qū)立體定向移植術(shù)。手術(shù)后3月深度麻醉后取雙側(cè)紋狀體及SN區(qū)域腦組織進(jìn)行總抗氧化能力(Totalantioxidantcapacity，T

11、-AOC)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧歧化酶(SOD)活性和脂質(zhì)過氧化物質(zhì)丙二醛(MDA)含量的測定。以配對(duì)的t檢驗(yàn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，進(jìn)行雙側(cè)比較。 結(jié)果：與對(duì)照側(cè)比較，移植側(cè)紋狀體和黑質(zhì)腦組織T-AOC指數(shù)和GSH-Px活性顯著升高，差異具有顯著性意義(p＜0.01)；SOD活性顯著下降，MDA含量顯著下降，差異具有顯著性意義(p＜0.01)。 結(jié)論：PDMPTP猴模型自體頸動(dòng)脈體細(xì)胞紋狀體移植后，能夠顯著提

12、高腦組織抗氧化能力；通過抗氧化應(yīng)激作用的增加實(shí)現(xiàn)神經(jīng)保護(hù)，可能是發(fā)生作用的重要機(jī)制。 第五部分：帕金森病慢性猴模型自體頸動(dòng)脈體團(tuán)快紋狀體移植后GDNFmRNA的表達(dá)和蛋白質(zhì)的變化 目的：探討帕金森病慢性猴模型自體頸動(dòng)脈體團(tuán)快紋狀體移植后GDNFmRNA的表達(dá)和蛋白質(zhì)的變化。 方法：4只按非人類靈長類帕金森病評(píng)分量表(PPRS)評(píng)價(jià)，行為學(xué)癥狀持續(xù)穩(wěn)定1月的慢性PDMPTP猴模型，應(yīng)用MRI(GESigna1.5T

13、NV/i)進(jìn)行移植術(shù)前定位，取一側(cè)的自體頸動(dòng)脈體細(xì)胞團(tuán)塊，使用Leksell立體導(dǎo)向系統(tǒng)(Leksell，GM695)行紋狀體區(qū)立體定向移植術(shù)。手術(shù)后3月分別提取紋狀體、SN區(qū)域RNA進(jìn)行RT-PCR，比較兩側(cè)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)mRNA表達(dá)的變化；采用Westernblot印記法檢測紋狀體、SN區(qū)域GDNF蛋白質(zhì)表達(dá)變化。 結(jié)果：與對(duì)照測比較，移植側(cè)紋狀體和黑質(zhì)區(qū)域GDNFmRNA表達(dá)顯著增高，差異具有極顯著性